学习细菌的革兰氏染色原理和方法.docx

实验细菌的染色 细菌的单染色法 细菌的革兰氏染色 芽抱染色 荚膜的染色 实验目的 1、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌 的简单染也法? 厶初步认识细菌的形态特征。 3、 学习细菌的革兰氏染色原理和方法 4、 了解细菌的特殊形态结构： 芽抱、荚膜的染色 5、 学习训练无菌操作技术? 1细菌的简单染色 实細理 细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上濒色? 简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一 种方法，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察? 为在中性、械常用碱性染料进行简单染色， 为在中性、械 性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷” W 碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电蒂” 因此诚性染料的染色部分很容易与细菌结合使细 菌着色经染色后的细菌细胞与背景形成鲜瞬的 对比在显微镜下更易于识别? 鸟覚塑作简单染色的染料有J 鸟覚塑作简单染色的染料有J美藍、结晶紫、碱性 复红等. 红等酸性染料染色9 衆 实酬料 1、菌种 金黄色葡萄球菌24h培养物 2、染色剂 吕氏孩性美童染液 齐氏石碳酸复红染液 操作步骤 操作步骤 染色 镜检 染色 镜检 无菌操作 涂片1 涂片1 干燥1 定1 水洗1 1 干 燥1 操作步 操作步H (continued) 1、涂片 取两块载玻片.各滴一小滴（或用接种环沾］IO 生理盐水（或无菌水）于玻片中央，用接种环以无 菌操作从枯草杆菌（Id）斜面上挑取少许菌苔于水 滴中，混合并涂成薄膜. 如用菌悬液或液体培养物，可用接种环挑瞰卜 2环直接涂于载玻片上? Notes: 1） Notes: 1）载玻片要洁净无油迹 2）滴生理盐水 和取菌不宜过多 3）涂片要涂抹均匀，不宜过厚. 操作步骤(continued) 操作步 操作步 91 (continued) 2、干燥室温自然干燥 3、固定 固定的目的:1Y1 固定的目的: 1Y1 1）使细胞质凄固》以固定细胞形态* 2）并使菌体牢固地附着在载玻片上. 固定方法: 热固定：涂面朝上》通过火焰数次 注意：温度不宜过高，以玻片背面不烫手为宜” 否则会改变甚至破坏细胞形态 操作步骤 操作步骤(continued) 染色 ?将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液于涂片上 （染液刚好覆盖涂片薄膜为宜） （染液刚好覆盖涂片薄膜为宜） ? 美蓝染色卜2min：石碳酸复虹染色釣lmin. 5、水洗 倒去染液.用洗瓶（内装自来水）轻轻冲洗直至涂 片上流下来的水无色为止；染色废液收集在废液缸中. Note: 水洗时》不要直接冲洗涂面，而应使水从载 玻片的一端流下*水流不宜过急，以免涂片薄膜脱落? 6、干燥 自然干燥或用电吹风吹干也可用吸水紙吸干? 7、镜检 细菌个体微小，一般使用油镜观察细菌个体影态. 7、镜检 7、镜检(continued) 操作步骤（continued） Notes: 1） 必须等涂片完全干后才可滴加香柏油 2） 油镜使用完毕，切记按规定步骤擦干净. 否则可能损害镜头 「苯涸在另一片擦镜紙上,擦拭镜头：C）再用 一小片擦镜纸擦去镜头上可能残留的二甲苯? 2、革兰氏染色 “单染色法，只能观察微生物的大步、形状、 和细胞排列状况”但不能鉴别微生物以及 它的特殊构造等? ，复染色法：用两种或两种以上染色液进行 染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称 鉴别染色法?常用的有： 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽抱染色法、 荚膜染色法等? 3） 3）酒精脱色; 4）番红复染 革兰氏染色（Gram stain） 1984年，丹麦医生Gram釆用革兰氏染色法细 菌细胞壁区分为两种类型：革兰氏阴性（G+） 和革兰氏阳性（G-） 革兰氏染色步骤： 1）结晶紫初染；2）碘液媒染; 实验原理 G- 周质空间外堆层 周质空间 外堆层 外酸萤白 ——j!fi3 n —基质蚤白 或孔爱白 O特异侧樋 -磷购 丿 -肽蘿樽（内弟凰） 一周质空间 f细胞脱 图2柑隼兰氏阳性细岡和垠兰氏阴性细菌细杷蜃构遭的比较 G +菌：细胞壁厚，肽聚糖网 状分子形成一种透性屏障，当 乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔 障缩小，故保留结晶紫-碘复 合物在细胞膜上。呈紫色。 G —菌：肽聚糖层薄，交联松 散，乙醇脱色不能使其结构收 缩，其脂含量高，乙醇将脂溶 解，缝隙加大，结晶紫-碘复 合物溶出细胞壁，番红复染后 呈红色。 细菌的特殊形态结构 2芽抱：休眠体，不利环境下产生，耐受各 种极端环境. 荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体 实验材料 枯草芽抱“大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、 杆菌(2d)、胶质芽胞杆菌 枯草芽抱 ，革兰氏染色液一套 ，绘图、 写实验报告 ，绘图、 写实验报告 实验步骤 革兰氏染色 枯草杆菌的芽抱染色 荚膜的染色 革兰氏染色的步骤 L涂片 2、初染：在做好的涂面上滴加草 酸锻结晶紫染液，染1分钟，倾 去染液