BCA法和考马斯亮蓝法测蛋白质浓度.pdf

精品文档 分光光度法介绍 分光光度法是利用溶液中特定溶质的光吸收测定其浓度的方法， 其基本原理是根据 Lambert 和 Beer 定律。 一 Lambert 定律 当一束平行单色光垂直照射于一均匀物质溶液时， 溶液将吸收一部分光能， 使光的强度减弱。 若溶液的浓度不变，则在溶液中的光程越长，光线强度的减弱也越显著。 设：入射光强度为 I 0 ，透射光强度为 I ，L 代表光在溶液中的光程。 I0 lg =K 1 L I 1 K 是常数，受光线波长，溶液性质，溶液浓度影响。 二 Beer 定律 当一束光通过一溶液时， 光能被溶液介质吸收一部分，若光程不变，则溶液的浓度越大，光 吸收越强，透射光强度的减弱也越显著，光线减弱的比例与溶液浓度呈正比。 I0 2 lg =K C I K 为吸收系数，是常数。溶液对光吸收的强弱与溶液浓度 C 成正比。 2 三 Lambert-Beer 定律 将以上两个定律合并： Io lg =KCL I Io I 令 A=lg T= 则 A=KCL=-lgT I Io T 为透光度， A 为吸光度， K 为消光系数 四 待测样品浓度的计算 A 标 =KC标 L A 样 =KC样 L 由于是同一物质及相同的光程，则： A 样 /A 标 =KC样 L/KC 标 L=C样 /C 标 即： C 样 = （A 样/A 标 ）*C 样 故已知标准溶液的浓度及吸光度，依据公式可计算出待测样品溶液的浓度。 。 1欢迎下载 精品文档 一 实验名称： BCA 法测定蛋白质含量 二 实验原理： BCA即二奎碄甲酸。在碱性条件下，蛋白的肽键结构将二价铜离子还原为亚铜离子，亚铜离 子与 BCA试剂形成稳定的紫色络合物， 并在 562nm 处有最大的光吸收值， 该复合物颜色深浅 与蛋白质的浓度成正比，故可通过吸收值的大小对蛋白质进行定量。 三 实验步骤： A 标准品的稀释： 将 9 支干燥的 1.5ml 离心管编号，按表加入下列试剂： BCA法标准曲线和样品测定 1.2ml 离心 蛋白质终浓度（μ ddH2O（μL） 2mg/mLBSA（μL） 管 g/mL) A 0 50 μL 标准品 2000 B 125 375 μL 标准品 1500 C 325 325 μL 标准品 1000 D 175 175 μLB 管混合液 750 E 325 325 μLC管混合液 500 F 325 325