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生化实验设计
蛋白质的提取与分离纯化
主讲人:
第三组组员:
华中师范大学化学学院
已知某蛋白的分子量约为17kDa,等电点
39~4.1,它能耐一定的高温,在90°加热
3~4min后仍然能够保持80%的活性。该蛋白
含有较多的疏水性残基,与Ca2结合后可以暴
露它的疏水基团。该蛋白的作用是作为生物体
内酶的激活剂。请设计一个从脑组织中提取和
分离纯化该蛋白的实验方案,要求写出具体的
步骤和理由,以及检测方法。
文献查彳
钙
8个氨基
酸组成
9-4.1之
间,分子
能够耐
定的高
n后仍然
能够保」
分子中
含有较
a2+结合
后可以
Calmodulin(caM)分子空间结构
整个实验过程一般可分为5个阶段:
①材料的选择和预处理②细胞的破碎(有时
需进行细胞器的分离)③提取④纯化(包括等
电点沉降法,盐析,有机溶剂沉淀,吸附、层析、
等)⑤分析鉴定。
实验步骤:
材料的选定:大鼠脑组织
预处理:将切取的组织用4℃预
冷的0.01moⅥ的PBS漂洗去血渍,再用
滤纸吸干残留的PBS(磷酸盐缓冲液)
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