高效液相色谱法EP4.pdf

精品文档 2。2 。29 液相色谱法（ EP4） 液相色谱法（ LC）是一种根据两种互不相溶的相之间种类分布的不同而进行色谱分离的 方法。在这两种互不相溶的相中，移动相是一种渗过色谱柱中固定相的液体。 液相色谱法（ LC）主要基于吸附、质量分布、离子交换、尺寸排阻或立体化学相互作用 的原理。 仪器 液相色谱法的仪器包括：泵系统、进样器、色谱柱（可用柱温控制器） 、检测仪和数据采 集系统（也可用积分仪或图形记录器） 。移动相从一个或多个贮器流出，通常以恒速经过色谱 柱，再流经检测仪。 泵系统 液相色谱法所用的泵系统需以恒定流速输送移动相，应尽量减少压力波动，如将加压溶 剂通过脉冲减幅装置进行传送。管道和接头要能承受泵系统产生的压力。液相色谱泵可以与 能将系统中裹入气泡排出的设施相连接。 微处理器控制系统能根据设定好的程序准确地输送恒定（等度洗脱）或不同成分（梯度 洗脱）的移动相。梯度洗脱时，泵系统从多个贮器发送溶剂，将泵调到低压或高压即可对溶 剂进行混和。 进样器 用可在高压下使用的进样系统在（或靠近）色谱柱顶部将样品溶液注入流动着的移动相 中。使用手动操作的固定回路变量装置或自动进样器进样。手动分次注入回路会降低进样量 的精确度。 固定相 液相色谱法中使用的固定相有多种，包括： — 二氧化硅、氧化铝或多孔石墨， 用于正常相色谱法。该方法是根据吸附和（或）质量分 布的不同进行分离。 — 树脂或带酸基（或碱基）的多聚体，用于离子交换色谱法。该方法是在待分离的离子与移 动相中的离子之间的竞争基础上进行分离。 — 多孔硅石或多聚体，用于尺寸排阻色谱法。该方法是根据分子量之间的不同进行分离的， 与空间排阻法色谱法相对应。 — 多种由多聚体、硅石或多孔石墨经过化学变性的固定相，用于反相液体色谱法。该方法是 主要根据移动相和固定相之间的分子隔离来进行分离。 — 经过特殊化学变性的固定相如纤维素或直链淀粉衍生物、蛋白质或肽、环糊精等，用于 旋光对映体的分离（手性色谱法） 大多数分离都基于一种隔离机制，即用化学变性硅作固定相，用极性溶剂作移动相。载 体（如二氧化硅的硅烷醇基）的表面与各种硅烷试剂发生反应，在载体表面产生以共价键联 。 1欢迎下载 精品文档 系的、覆盖大量活动部位的甲硅烷基衍生物。键合相的性质是确定色谱系统分离性能的一个 重要参数。 现将常用的键合相列于下表中： 2 7 3 8 辛基 = Si- （CH） -CH C 十八烷基 = Si- （CH2 ）17-CH3 C18 2 n 6 5 6 5 苯基 = Si- （CH） - （C H） C H 2 3 氰基丙基 = Si- （CH） -CN CN 2 3 2 2 氨基丙基 = Si- （