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1 . (2019· 山东济南高三模拟 ) 蓝藻兼具微生物和植物的优点, 是一种独特 的基因工程受体系统。很多蓝藻含有质粒,但其质粒不能直接作为运载体, 需要构建成穿梭质粒表达载体, 才能使目的基因在蓝藻中有效的复制和表达。 回答下列问题: (1) 据图 1 推测,与普通基因表达载体相比,穿梭质粒表达载体既能在 ________ 中复制,也能在 ________ 中复制。为了筛选转入了穿梭质粒表达载 体的蓝藻,应在选择性培养基中添加 ________ 。 (2) 若大肠杆菌作为受体细胞,应选用 ________ 处理使其成为感受态细 胞。 采用基因枪法将目的基因导入蓝藻前,可使用 ________( 填“纤维素酶和 果胶酶”“溶菌酶”或“胶原蛋白酶” ) 去除蓝藻的细胞壁。 (3) 已知 DNA 复制时,子链的延伸方向是 5 ′→ 3 ′。使用 PCR 技术检 测转基因蓝藻中是否存在人胸腺素基因可选择图 2 中 1 、 2 、 3 、 4 四种单链 DNA 片段中的 ________ 作为引物,此过程还需要 ______________ 酶。 答案 (1) 大肠杆菌 蓝藻 卡那霉素 (2)Ca 2 + 溶菌酶 (3)2 和 3 热稳定的 DNA 聚合 ( 或 Taq ) 解析 (1) 据图 1 推测,与普通基因表达载体相比,穿梭质粒表达载体既 有大肠杆菌质粒复制原点,也有蓝藻质粒复制起点,因此既能在大肠杆菌中 复制,也能在蓝藻中复制。为了筛选转入了穿梭质粒表达载体的蓝藻,应在 选择性培养基中添加卡那霉素。 (2) 若大肠杆菌作为受体细胞,应选用 CaCl 2 处理使其成为感受态细胞。 采用基因枪法将目的基因导入蓝藻前,要去掉其细胞壁,纤维素酶和果胶酶 用于去除植物细胞壁,胶原蛋白酶用于动物细胞培养中使细胞分散开,因此 去除蓝藻的细胞壁可用溶菌酶。 (3) 据图 2 分析,由于 DNA 复制时,子链的延伸方向是 5 ′→ 3 ′ ,因此 设计引物时应选择 2 、 3 , PCR 还需要热稳定的 DNA 聚合酶 ( 或 Taq 酶 ) 。 2 . (2019· 安徽省 A10 联盟高三试题 ) 真核生物基因中通常含有内含子, 而原核生物基因中没有,原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的 RNA 序列的机制。 下图表示基因文库的制备和从基因文库中提取胰岛素基因 的过程。回答下列问题: (1) 从基因结构分析,与基因组文库中的基因相比,从 cDNA 文库中获得 的目的基因缺少的结构有 ____________________________( 至少写两个 ) 等。 图中①过程中存在的碱基配对方式有 ______________________________( 模 板上的碱基在前 ) ;②过程所用的工具酶有 ________________________ 。 (2) 为了便于导入基因,细菌培养基中一般加入 ________________ ,理由 是 ______________________________________________ 。 (3) 依据图中杂交结果, 应选取培养基上 ________( 填字母 ) 菌落继续培养, 才能获得含有胰岛素基因的受体菌。 (4) 从大肠杆菌中获得的“胰岛素”未能达到期待的生物活性, 从细胞结 构角度分析,其原因是 _____________________________ 。 答案 (1) 启动子、终止子、内含子 A - T 、 U - A 、 G - C 、 C - G 限 制酶、 DNA 连接酶 (2)CaCl 2 ( 或钙离子 ) 钙离子使细菌处于感受态 ( 或钙离子能提高细菌从 外界吸收 DNA 的能力 ) (3)b (4) 大肠杆菌中缺少对胰岛素进行加工和修饰的内质网和高尔基体 解析 (1) 从基因结构分析,与基因组文库中的基因相比,从 cDNA 文库 中获得的目的基因缺少启动子、 终止子、 内含子等结构。 图中 ① 过程以 mRNA 为模板合成 cDNA ,所以存在的碱基配对方式有 A - T 、 U - A 、 G - C 、 C - G ; 构建基因表达载体需要用限制酶切割目的基因和载体, 然后需用 DNA 连 接酶进行连接。 (2) 为了便于导入含目的基因的基因表达载体,细菌培养基中一般加入 CaCl 2 ( 或钙离子 ) ,原因是钙离子能使细菌处于感受态,使基因表达载体更容 易进入受体细菌内。 (3) 依据题图中杂交结果可知,应选取培养基上 b 菌落继续培养,才能获 得含有胰岛素基因的受
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