硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖.pdfVIP

精品文档 硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖 植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指 标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。 （一）苯酚法测定可溶性糖 【实验原理】 植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。 苯酚法测定可溶性糖的原理 是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物， 在 10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比， 且在 485nm波长下有最大吸收峰， 故可 用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵 敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定 160min 以上。 【实验仪器及试剂】 1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、 20mL 刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。 2．试剂： （1）90 ％苯酚溶液：称取 90g 苯酚（ AR），加蒸馏水 10mL溶解，在室温下可保存数月。 （2 ）9 ％苯酚溶液：取 3mL 90 ％苯酚溶液，加蒸馏水至 30mL，现配现用。 （3 ）浓硫酸（比重 1.84 ）。 （4 ）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在 80 ℃下烘至恒重， 精确称取 1.000g 。加少量水溶解， 移入 100mL容量瓶中，加入 0.5mL 浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。 （5 ）100ug/L 蔗糖标准液：精确吸取 1％蔗糖标准液 1mL加入 100mL容量瓶中，加水定容。 【实验步骤】 1．标准曲线的制作： 取 20mL 刻度试管 11 支， 从 0 －10 分别编号， 按表 27 －1 加入溶液和 水，然后按顺序向试管内加入 1mL9 ％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以 5 －20s 。加入 5 mL 浓硫酸，摇匀。比色液总体积为 8 mL，在恒温下放置 30min 。显色。然后以空白为参比，在 485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直 线方程。 2．可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取 0.10 －0.30g ，共 3 份，分别放入 3 支刻度试管中，加入 5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取 30min （提取 2 次），提取液过滤入 25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。 3．测定吸取 0.5mL 样品液于试管中（重复 2 次），加蒸馏水 1.5mL，同制作标准曲线的步 骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定光密度。由标准线性方程求出糖的量， 按下式计算测试样品中糖含量。 式中： C 一标准方程求得糖量（ ug ） α一吸取样品液体积（ mL） V－提取液量（ mL） n 一稀释倍数 W一组织重量（ g ） （二） 蒽酮法测定可溶性糖 【实验原理】 糖在浓硫酸作用下， 可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛， 生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽 酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物， 在一定范围内， 颜色的深浅与糖的含量成正比， 故可用于糖 的定量。 。 1欢迎下载 精品文档 该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物， 不但可以测定戊糖与己糖， 而且可以测所有 寡糖类和多糖类，