林病研究法-实验指导.pdfVIP

精品文档 实验一 培养基的制作 【实验目的】 掌握常用培养基的制备和用途。 主要是真菌常规培养基 （马铃薯葡萄糖琼脂 培养基）和细菌常规培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）的制作。 【实验原理】 培养基是用人工的方法将多种营养物质按照一定比例配置成的供微生物生 长代谢的基质，含有微生物生长发育所需的水分、碳源、氮源、无机盐、生长素 以及某些特殊的微量元素。 根据不同的微生物种类和不同的实验目的， 培养基大 致分为 10 类：天然培养基、合成培养基、半合成培养基、液体培养基、固体培 养基、半固体培养基、基础培养基、增值培养基、选择培养基和鉴别培养基。在 培养基配置完成之后，必须经过严格的灭菌，彻底杀死其中原有的一切微生物。 【实验材料】 新鲜马铃薯、葡萄糖、琼脂、牛肉浸膏、蛋白胨。 【实验设备及用品】 菜板，小刀，天平，称量纸，小锅，纱布，玻璃棒，量杯，烧杯，铁架台， 分装漏斗， 记号笔，标签，牛角匙，棉花，棉绳，三角瓶， 试管 （18 mm×18 mm）， 培养皿， pH试纸；可调式电炉或微波炉，高压灭菌锅。 【实验步骤】 1、马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA)培养基制作 （1）将新鲜马铃薯去皮备用。 （2 ）称取去皮的新鲜马铃薯 200 g ，切成 1 cm 见方的小方块放于锅中，加 入 1000 mL 自来水，置于可调式电炉上煮沸 20 min ，煮沸过程中称取葡萄糖 20 g、琼脂 20 g 备用。 （3 ）用 4 层纱布直接倾倒过滤，滤去残渣，洗锅后，将滤液倒入锅中。 （4 ）调节培养基酸碱性，常用 1%的 HCL及 1%的 NaOH进行调节。马铃薯葡 萄糖琼脂培养基往往略带酸性， 培养真菌无需调节酸度， 培养细菌则要调节到中 性。 （5 ）将称好的琼脂放入锅中融化， 此过程中应注意不断地搅拌和控制火候， 避免培养基溢出和烧焦；直至琼脂完全融化，再加葡萄糖，搅拌均匀，补充水量 至 1000 mL 。可事先在锅内用记号笔标记好 1000 mL的刻度线，直接加水即可。 （6 ）根据培养基不同的使用目的，分装到不同的容器中，如三角瓶、试管 和培养皿等。 由于培养基含有丰富的营养物质， 因此在分装过程中一定要注意避 免培养基玷污管口、瓶口，以免弄湿或粘住棉塞，造成污染，影响随后的工作。 由于琼脂培养基易凝固，在分装过程中应保持琼脂培养基在 60℃左右。如遇凝 固，可再次加热使其融化。分装三角瓶和试管时，采用带有橡皮管的大漏斗，橡 皮管上加上一个弹簧夹。 分装前， 在试管管壁外用记号笔做好一定量的记号， 一 。 1欢迎下载 精品文档 般试管分装量为试管容量的 1/5 或 1/7 。分装时，小心将橡皮管放入试管，松开 弹簧夹，向试管内注 入定量的培养基，夹紧弹簧，再小心抽出试管，切勿使培养 基触及管壁和管口。 （7 ）分装完成后， 应按瓶口、管口的大小塞上大小适度、 松紧合适的棉塞， 以阻止外界微生物进入培养基内， 防止由此导致的污染， 并能够保证良好的通气 性能。塞好棉塞后， 将试管培养基扎成一捆放于试管筐内。 但由于棉塞外面容易 附着灰尘和杂菌，灭菌时容易凝结水汽，因此在棉塞外面包裹上牛皮纸。 （8 ）培养基制作完成后，必须及时灭菌，否则会导致杂菌污染，从而导致 培养基变质。 实验室一般采取高压蒸汽灭菌，