徒手切片制作方法.pdfVIP

。 一、目的要求 徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。 所需的仪器用具简单， 药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体 结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。但是徒手 制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也 不能制成连续切片，这些均为不足之处。 二、材料、用品 1、用品 显微镜、剃头刀（或刀片） 、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒 杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。 1%番红水溶液（或 50%酒精 溶液），0.5%固绿 95%酒精溶液， 70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲 苯和中性树胶或加拿大树胶等。 三、方法与步骤 1 、选材 所用材料不宜太软或太硬。一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、 叶柄等均可使用此法。质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成 宽约 5～6 毫米，长 1～ 1.5 厘米的小块，夹在夹持物 ( 如胡萝卜根或 马铃薯块茎等 ) 中进行切片。使用夹持物时，先将夹持物的中央切成 两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷 。 1 。 成筒状再切。 2 、切片 （1）盛清洁的水于培养皿中。然后用左手的拇指及食指、中指夹住 材料，拇指的位置要低于食指， 并使材料的上端伸出指外 2～3 毫米， 材料的切面必须保持水平方向。 （2） 右手执刀 ( 剃头刀或刀片 ) ，平放在左手食指之上，刀口向内， 自左前方向右后方滑行切割， 要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。 (3) 拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损 伤材料或切得不平。 (4) 切片过程中， 如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时， 必须立 即削平。 (5) 刀片或剃刀必须锋利， 材料及切片均需经常沾水， 以保持材料湿 润、润滑。 (6) 切下的薄片可随时涮入培养皿的水中， 以备观察 ; 等切到相当数量 后 ; 再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。如想短期保 存，可用水或甘油封藏。如希望长期保存所切的材料，则还要经过以 下几个步骤做成永久玻片标本。 3、固定 挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有 70%酒精的染色皿中进行固 定。固定时间为 16 分钟或更长时间。 。 2 。 4、染色、脱水、透明 （1）用吸水管吸去 70%酒精，染以 1%番红（ 50%酒精溶液）约 30 分 钟。 （2）再用吸管吸去番红， 换用 70%→85%→95%酒精进行冲洗、 脱水， 每级酒精 3～5 分钟。 （3 ）复染色。吸去酒精，用 0.5%固绿 (95%酒精溶液 ) 进行复染色，时间为 0.5 分钟。 （4 ）冲洗、脱水。用 95%酒精冲洗 1 次，时间 10 秒。后移入纯酒精 中脱水 2～3 次，每次 3～5 分钟。 （5）透明。吸去纯酒精，放入 1/2 二甲苯— 1/2 纯酒精溶液中脱水 和透明 1 次，时间 5 分钟。 （6）吸去脱水透明液，换以纯二甲苯透明 2