Neuritin对大鼠创伤性脑损伤后线粒体途径介导神经元凋亡中作用机制的研究.pdfVIP

摘要 目的： 研究Neuritin 是否通过抑制大鼠创伤性脑损伤后线粒体凋亡通路介导的神经元凋亡 从而提供神经保护作用。 方法： 96 只健康SD 成年雄性大鼠(体重为270-320 g)被随机分为假手术 （Sham）组、创 伤性脑损伤（TBI）组、创伤性脑损伤+生理盐水（TBI+saline）组、创伤性脑损伤+Neuritin （TBI+Neuritin）组，每组分配24 只大鼠。采用改良的Feeney 自由落体法将20 克重量 30 的打击锤从 厘米高处的金属套管中自由落下打击大鼠右顶叶皮层造成中度脑挫裂伤， 打击力度为600gcm。利用HE 染色鉴定模型是否建立成功；在TBI 后24 小时对各组大 鼠进行mNSS神经行为学评分；利用大脑干、湿重法检测大鼠脑组织含水量；利用伊文 思蓝染色渗出评价大鼠血脑屏障通透性变化情况；利用TUNEL 染色检测大鼠脑组织皮 层神经元凋亡变化情况；利用Westernblot 技术检测各组大鼠线粒体凋亡通路关键蛋白 Bax、Bcl-2、Cytochromec、Caspase-9 的蛋白表达变化；利用透射电镜技术观察大鼠神 经元线粒体超微结构变化。 结果： （1）在建模上，采用Feeney 自由落体法可成功建立大鼠TBI 模型。Sham 组大鼠 脑组织完整、无挫裂伤，TBI 组肉眼可见右顶叶脑皮层组织挫裂伤伴血细胞淤积于伤灶， HE TBI 24 通过 染色镜下可观察到皮层结构连续性遭到破坏并伴有大量红细胞沉积； 后 小时大鼠有明显的神经行为学缺陷，并出现脑组织含水量升高，血脑屏障通透性升高， 神经元凋亡数量明显增加，线粒体凋亡通路促凋亡因子Bax、Cytochromec、Caspase-9 表达增高，抑凋亡因子Bcl-2 表达显著降低，同时透射电镜观察发现线粒体超微结构遭 到破坏。 (2)Neuritin 治疗后24h，大鼠神经行为学缺陷得到改善，脑水肿程度减轻，血脑屏 障破坏程度降低，脑组织皮层神经元凋亡数量显著减少，促凋亡因子Bax、Cytochrome c、Caspase-9 表达明显降低而抑凋亡因子Bcl-2 表达显著升高，线粒体超微结构破坏得 到明显改善。 结论: (1)创伤性脑损伤后线粒体凋亡通路参与介导皮层神经元凋亡； (2)Neuritin 通过抑制神经元凋亡、减轻血脑屏障破坏等在创伤性脑损伤后提供神经 保护作用。 关键词：Neuritin；创伤性脑损伤；继发性脑损伤；线粒体；神经元凋亡。 Abstract Objective: This study was to investigate whether Neuritin provides neuroprotective effects by inhibiting the mitochondrial apoptosis pathway-mediated neuronal apoptosis after traumatic brain injury (TBI)inrats. Methods: 96healthy SD adult malerats (270-320g) were randomly divided into the Sham (Sham), traumatic brain injury (TBI), traumatic brain injury + saline (TBI + saline), and traumatic brain injury + Neuritin (TBI + Neuritin) groups, 24 rats were assigned to each group. A modified model of Feeneys free-fall method was used to establish the traumatic brain injury model.A 20-gram hammer was dropped freely from a 30 cm high metal cannula to strike the rats right parietal cortex, resulting in moderate