南京农业大学考研生化试验.pdfVIP

精品文档 实验一 缓冲液配制和 pH值测定 实验二 荧光光度法测定核黄素的含量 实验三 茚三酮比色法测定赖氨酸含量 实验四 考马斯亮蓝 G-250 比色法测定蛋白质含量 实验五 2,6- 二氯酚靛酚滴定法测定 L- 抗坏血酸的含量 实验六 间隔法测定过氧化物酶的活力 实验七 连续记录法测定过氧化氢酶的活力 实验八 纸电泳分离鉴定三种腺苷酸 综合性开放实验 一 . 目的 了解配制缓冲液和 pH计的基本原理。 掌握配制缓冲液和使用 pH计的基本方法。 二 . 原理 在一定的酸或碱作用下，能够自动调整和保持溶液 pH值基本不变的溶液称为缓冲液。以 HAc和 NaAc组成的缓冲液为例，它的 pH符合下面关系： pH= p Ka lg[HAc]/[Ac ] ，因此改变 [HAc]/[Ac ] 的比值，可以在一定范围内配制不同 pH 值的缓冲液。缓冲液的缓冲容量大小不仅与其总浓度有关，而且与其组分 比也有关。总浓度越大，缓冲容量越大；总浓度一定，其组分浓度比越接近 1，缓冲容量越大。缓冲液适当稀释或浓缩，其 pH值基本保持不变。 测定 pH值的 pH计（或称酸度计），一般是由一支对 H+敏感的玻璃电极和一支不随溶液中被测离子活度变化而改变其本身电位的甘汞电极以及一个测量电 位的电位计所组成，两支电极和测试溶液构成一个伏特电池，电极在不同的 pH值溶液中产生不同的电位，它符合电化学理论中的 Nernst 方程，即 E = 0 E (2.303RT/F)pH 。测定中，首先测得已知 pH 的标准缓冲液中产生的电位 Es，然后，由测得未知 pH缓冲液中产生的电位 Ex 通过公式 可直接算出该缓冲液的 pH （pHx）。为了方便， pH计上装有一个定位调节器，当测量标准缓冲液 pH时，利用它可把读数直接 指示在标准的 pH值上，这样在以后测未知 pH的缓冲液时，该电位读数也就直接表示相应的 pH值。在本实验使用的 Beckman 61 pH 计计中，以上过程均由 仪器自动完成。 三 . 实验试剂及设备 1. 试剂 2 4 2 2 4 2 磷酸氢二钠（ Na HPO·12HO）、磷酸二氢钠（ NaHPO ·2H O） 2O）、三羟甲基氨基甲烷（ Tris ） 冰醋酸、醋酸钠（ NaAc ·3H 甘氨酸、盐酸、标准 pH缓冲液（ pH4.01 、7.00 、 10.01 ） 2. 仪器 电子天平（感量 0.001g ） pH 计 3. 器材 。 1 欢迎下载 精品文档 容 量 瓶： 100mL ×2 量 筒： 50mL×1 移 液 管： 10mL ×1 烧 杯： 100mL 1 200mL 2 漏斗、