PEG诱导动物细胞融合.ppt

实验六 PEG 诱导动物细胞融合 ( 必做，验证性实验） ? 了解细胞融合的基本原理 , 并掌握 PEG 诱导动物细胞融 合的方法 实验目的 概述 细胞融合 ? 细胞融合 (cell fusion) 是指两个或多个细胞通过质膜融合 形成单个双核或多核细胞的现象称为细胞融合 , 结果 产生杂交细胞 (hybrid) , 亲本相同的融合细胞称为同核体 (homokaryon) , 反之称为异核体 (heterokaryon) . ? 细胞融合在机体正常发育的各个时期都可以观察到 . ? 上世纪 60 年代首次体外人工诱导细胞融合获得成功 以来 , 由于其应用的广泛性和广阔前景 , 已逐步发展 成为重要的细胞工程技术 . ? 人工诱导细胞融合主要包括 : 病毒和化学融合剂以及 电融合和激光融合等方法 . 细胞融合的意义 ? 细胞融合能把亲缘关系较远，甚至毫无 亲缘关系的生物体细胞融合在一起，为 远缘杂交架起了桥梁，是改造细胞遗传 物质的有力手段。它的意义在于从此打 破了仅仅依赖有性杂交重组基因创造新 种的界限，扩大了遗传物质的重组范围。 PEG 诱导鸡血细胞融合 ? PEG 是乙二醇的多聚物 , 存在不同分子量的多 聚体 , 它可改变各类细胞的膜结构 , 使两细胞 相互接触部位的膜脂双层中脂类分子发生疏 散和重组 , 此时相互接触的两细胞的胞质沟通 成为可能 , 从而造成细胞之间发生融合 . ? PEG 介导细胞融合 , 其融合效果受以下几种因 素的影响 : 分子量及浓度、 pH 值、处理时间和 温度等 . ? 以鸡血细胞为实验材料，经 PEG 诱导处理后， 形成具有二个或多个核的细胞，可视为融合 细胞 . ? 实验原理 实验材料及试剂 ? 材料：鸡静脉血 ? 试剂：生理盐水； GKN 液； Alsver 液； 50% 聚乙二醇 采取鸡血 1200r/min, 离心三次 5min,5min,10 min 取混合液 1mL 混合液 取血细胞沉淀 取适量稀释液 滴加于载玻片 镜检 滴加 PEG( 稀释液的 1/2) 静置 3 分钟 加入适量 GKN 稀释 加入 4mL 生理盐水 加入 Alsver 液混合 (1:4 v/v) 实验操作流程 实验结果 ? 观察时注意不同程度的融合现象。通常分为 五个阶段： ? 两细胞（或多细胞）接触，粘连； ? 细胞膜形成穿孔； ? 两细胞（或多细胞）的细胞质连通； ? 通道扩大，两细胞（或多细胞）连成一体； ? 细胞完全合并，形成一个含有两个或多个核 的细胞。 细胞融合过程