秦皮乙素通过氧化应激与内质网应激对SGC-7901细胞凋亡的影响.pdf

摘 要 摘 要 胃癌是在我国常见的恶性肿瘤之一，发病率居高不下，死亡率高，严重危害人类健 康，因此，胃癌治疗药物的开发刻不容缓。秦皮乙素是从中药秦皮中提取的一类香豆素 类化合物，具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤等多种药理作用。近年来的研究表明秦皮 乙素具有抑制多种肿瘤的增殖、侵袭迁移和诱导细胞凋亡等作用，并且涉及到多条信号 通路。本课题选用人胃癌 SGC-7901 细胞为研究对象，在以往研究中表明秦皮乙素可以 通过线粒体途径和死亡受体途径诱导细胞凋亡，因此本课题以氧化应激和内质网应激为 切入点，对秦皮乙素诱导人胃癌 SGC-7901 细胞凋亡的作用机制展开研究，以期为秦皮 乙素的抗肿瘤作用提供更加充分的理论依据。 方法：（1）Western Blot 法检测人胃癌 SGC-7901 细胞内质网应激相关蛋白 GRP78 与 CHOP 的表达；（2 ）MTT 法检测秦皮乙素对 SGC-7901 细胞增殖的影响；Hoechst 33258 法检测秦皮乙素对 SGC-7901 细胞凋亡的影响；（3 ）H2DCFDA 染色法检测秦皮 乙素对 SGC-7901 细胞中 ROS 水平的影响；MTT 法检测 NAC 对秦皮乙素抑制 SGC- 7901 细胞增殖的影响；Hoechst 33258 法检测NAC 对秦皮乙素诱导SGC-7901 细胞凋亡 的影响；（4 ）Western Blot 法检测秦皮乙素对 SGC-7901 细胞中 GRP78 、p-PERK 、p- eIF2α、ATF-4 、CHOP 蛋白表达的影响；MTT 法检测 TUDCA 对秦皮乙素抑制 SGC- 7901 细胞增殖的影响；Hoechst 33258 法检测TUDCA 对秦皮乙素诱导SGC-7901 细胞凋 亡的影响；（5 ）H2DCFDA 染色法检测TUDCA 对秦皮乙素诱导 SGC-7901 细胞中ROS 水平影响；Western Blot 法检测NAC 对秦皮乙素诱导SGC-7901 细胞中GRP78 和CHOP 蛋白表达影响。 结果：（1）通过Western Blot 法检测内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP 在人胃癌 SGC-7901 细胞中有表达，提示GRP78 与CHOP 等内质网应激相关蛋白表达的平衡与人 胃癌 SGC-7901 细胞的发生发展相关。（2 ）通过 MTT 法检测秦皮乙素可以抑制人胃癌 SGC-7901 细胞的增殖，随着秦皮乙素浓度的增加，细胞存活率越低，具有剂量依赖 性；Hoechst 33258 染色观察秦皮乙素0.28、0.56、1.12 mmol/L 处理细胞后细胞核质的 形态学变化，发现随着秦皮乙素浓度的增加，出现了细胞核质固缩、核碎裂等明显的细 胞凋亡形态学特征，提示秦皮乙素可通过诱导 SGC-7901 细胞发生凋亡，发挥其抗癌活 性。（3 ）H2DCFDA 染色观察用秦皮乙素 0.28、0.56、1.12 mmol/L 处理后细胞内 ROS 水平明显升高并具有剂量依赖性；用100 μmol/L 的NAC 预处理细胞1 h 后，MTT 法检 测NAC+秦皮乙素组细胞存活率（67.25±4.28 ）% 明显高于秦皮乙素组（56.36±4.68 ）% （P0.05 ），表明抑制 ROS 的产生能抑制秦皮乙素对 SGC-7901 细胞增殖抑制作用； Hoechst 33258 染色观察NAC+秦皮乙素组细胞凋亡程度较秦皮乙素组明显降低，表明抑 制 ROS 能抑制秦皮乙素的细胞凋亡作用，提示秦皮乙素诱导 SGC-7901 细胞凋亡与 ROS 密切相关。（4 ）通过Western Blot 法检测秦皮乙素0.28、0.56、1.12 mmol/L 给药后 - I - 哈尔滨商业大学硕士学位论文 细胞中 GRP78 、p-PERK 、p-eIF2α 、ATF-4 、