泡叶藻岩藻聚糖制备及其在高脂诱导C57BL_6J小鼠中的降脂机制.pdf

摘 要 摘 要 心脑血管疾病（cardiovascular and cerebrovascular disease, CVD)是危害人类 健康的重大疾病之一。有效的降脂治疗可有效降低其病发率和致死率。目前降脂 药物多以合成化合物为主，长期服用会产生严重的不良反应。岩藻聚糖（fucoidan ） 属于褐藻多糖，是一种高度复杂的硫酸化生物活性多糖，据报道，其在体内外具 有多种生物活性。 本研究采用水提醇沉法从泡叶藻（Ascophyllum nodosum . A.n）中提取A.n 岩 藻聚糖粗品，得率为3.8% ；利用ÄKTA-FPLC pure 150 蛋白纯化系统结合阴离子 交换柱（Q-SepharoseTM Fast Flow, QFF ）及分子筛层析柱（Sephacyl S-200 H.R ） 对Aw 进行分离纯化，最终得到A 1、A2 和A3 三个组分，得率分别为 14.1%、 32.3%和41.5% ；本研究中，由于A2 组分的岩藻糖占比（77.6%44.0% ）以及硫 酸根含量（16.6%12.0% ）均高于A3 组分。所以，选用A2 进行随后的实验。运 用凝胶渗透色谱法（gel permeation chromatography, GPC ）、高效液相色谱法（high performance liquid chromatography, HPLC ）及红外光谱法（infrared spectroscopy, IR ）等途径研究A.n 岩藻聚糖A2 结构特征。GPC 结果显示，A.n 岩藻聚糖A2 的重平均分子量（Mw ）、数均分子量 （Mn ）和z 均分子量 （Mz ）分别为207.2 kDa 、655.1 kDa 和555.1 kDa 。其糖含量、蛋白含量和硫酸根含量分别为60.4%、 0.1%和16.6%。HPLC 结果显示，A.n 岩藻聚糖A2 主要由甘露糖、半乳糖、木糖 和岩藻糖构成，摩尔比分别为1.0 : 1.1 : 5.4 : 26.0。 本文借助高脂诱导的 C57BL/6J 小鼠模型探讨其降脂活性及机制，以25 只 C57BL/6J 小鼠 （雄性，23 ± 4 g ）为实验对象，随机分为5 组，即空白对照组（n = 5 ）、模型组（n = 5 ）、非诺贝特组（n = 5 ，50 mg/Kg/d ）、低剂量A.n 岩藻聚糖 组（n = 5 ，50 mg/Kg/d ）和高剂量A.n 岩藻聚糖组（n = 5 ，200 mg/Kg/d ）。空白 组小鼠喂食普通饲料，其余各组小鼠喂食高脂饲料（含 21%脂肪和 0.15%胆固 醇）。灌胃给药6 周后采集小鼠的血液及各脏器组织样本。采用Western blot 分析 A.n 岩藻聚糖A2 对肝脏及小肠样本RCT 相关蛋白表达的影响。实验结果显示： A.n 岩藻聚糖A2 可以显著降低高脂血症小鼠的甘油三酯（triglyceride, TG ），总 胆固醇（total cholesterol, TC ）水平和附睾脂肪指数，同时提升高密度脂蛋白（high density lipoprotein-cholestrol, HDL-C ）的水平；在肝脏中，A.n 岩藻聚糖能够显著 上调B 类1 型清道夫受体（scavenger receptor class B type 1, SR-B1 ）、低密度脂 -I- 哈尔滨商业大学硕士学位论文 蛋白受体（low density lipoprotein receptor, LDLR ）、过氧化物酶体增殖剂激活受 体（peroxisome proliferators-activated receptor, PPAR ）α 和γ 、肝脏X 受体（liver X receptor, LXR ）β、ATP 结合盒转运体（ATP-binding cassette transporter, ABC ） A1 和G8 和胆固醇7-羟化酶（cholesterol 7-alpha hydroxy-lase, CYP7A1 ）蛋白表 达水平，下调前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin9 型（proprotein convertase subtilisin/kexin type 9, PCSK9 ）蛋白表达水平；在