真题答题大题须稍加整理.doc

在多种酶的作用DNADNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链互补配对原下可以变性解链成单链，在与启动子的参与下，根据碱基聚合酶DNA在高温时也可DNA 实验中发现，则复制成同样的两分子挎贝。在聚合酶链式反应以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入、dNTP就可以完成特聚合酶DNA定基因的体外复制。 PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合，现在使用的PCR仪实质上也是一台能够自动调控温度的仪器。 PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为三个基本步骤──变性、复性和延伸。 (!)变性（模板DNA解旋） 模板DNA经加热至90℃以上。一定时间后，使模板DNA双链解离，使成为单链，以便于它与引物结合，为下轮反应作准备。 (2)复性（退火） 模板DNA经加热变性成单链后，温度降到50℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。 (3)延伸 DNA模板－引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下以脱氧核苷酸为原料，以母链为模板，按碱基互补配对的原则与半保留复制的原理，合成一条新的DNA链。 循环数 变性 复性 延伸 第一次（预变性） 94°C，30s － － 30次 94℃，20s 52℃，20s 72℃，20s 最后一次（保温）