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课题3 血红蛋白的提取和分离
一、凝胶色谱法——血红蛋白的分离方法
1.概念
凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效
方法,也称作分配色谱法。
2.原理
形态:微小的多孔球体
(1)凝胶组成:大多数由多糖类化合物构成
结构:内部有许多贯穿的通道
(2)分离原理:
①相对分子质量较小的蛋白质:容易进入凝胶内部的通道,路
程较长,移动速度较慢,通过凝胶柱的时间较长。
②相对分子质量较大的蛋白质:无法进入凝胶内部的通道,只
能在凝胶外部移动,路程较 ,移动速度较快,通过凝胶柱的时间较
。
二、缓冲溶液
1.作用
在一定范围内,缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH 的
影响,维持pH基本不变。
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2.配制
通常由 1~2 种缓冲剂溶解于水中配制而成,调节缓冲剂的使
用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。
三、电泳——血红蛋白的分离或鉴定方法
1.概念
带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。
2.原理
(1)许多重要的生物大分子,如多肽、核酸等都具有 可解离的
基团,在一定的pH下,这些基团会带上正电或负电。
(2)在电场的作用下,这些带电分子会向着 与其所带电荷相
反的电极移动。
(3)电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及
分子本身的大小、形状的不同,使带电分子产生不同的迁移速度,从
而实现样品中各种分子的分离。
四、蛋白质的提取和分离过程
蛋白质的提取和分离一般分为四步:样品处理、粗分离、纯化
和纯度鉴定。
一、选择题
1.使用凝胶色谱法分离蛋白质实验中,相对分子质量不同的蛋
白质在凝胶中的行进过程,可表示为下图中(B)
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解析:凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效
方法。相对分子质量较小的蛋白质能进入凝胶内部通道,路程较长,
移动速度较慢;相对分子质量大的蛋白质,路程较短,移动速度较快,
首先洗脱出来。
2 .使用SDS—聚丙烯酰胺电泳的过程中,不同蛋白质的电泳迁
移率完全取决于(B)
A.电荷的多少 B.分子的大小
C.肽链的多少 D.分子形状的差异
解析:SDS能与各种蛋白质形成蛋白质SDS复合物,SDS所
的负电荷量大大超过蛋白质分子原有的电荷量,因而掩盖了不同蛋白
质间的电荷差别,使电泳迁移率完全取决于分子的大小。
3 .在血红蛋白的整个提取过程中,不断用磷酸缓冲液处理的目
的是(D)
A.防止血红蛋白被氧气氧化
B.血红蛋白是一种碱性物质,需磷酸中和
C.磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程
D.让血红蛋白处在稳定的pH范围内,维持其结构和性质
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解析:磷酸缓冲液的作用是稳定 pH ,从而维持血红蛋白的结构
和性质。
4 .蛋白质的分离与纯化是蛋白质研究的重要技术。下列有关叙
述不正确的是(A)
A.根据蛋白质分子不能透过半透膜的特性,可将样品中各种不
同的蛋白质分离
B.根据蛋白质所带电荷性质的差异及分子大小等,可通过电泳
分离蛋白质
C.根据蛋白质相对分子质量的大小,可通过凝胶色谱法分离蛋
白质
D.根据蛋白质的分子大小、密度不同,可通过离心沉降法分离
蛋白质
5.在提取血红蛋白的样品处理阶段,洗涤红细胞十分重要,其
目的是(B)
A.让红细胞破裂,释放血红蛋白
B.洗去血浆蛋白
C.防止血液凝固
D.保证红细胞的正常形态
解析:血液中含有多种蛋白质,除红细胞内的血红蛋白,血浆中
还含有多种蛋白质,这些蛋白质在血红蛋白释放出后会与其混合,需
要在红细胞破裂前将其除去。
6 .蛋白质提取和分离分为哪几步(C)
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