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1.1.1蛋白质的结构与功能 考点: 组成蛋白质的20种氨基酸的类别、分类依据及几种特殊氨基酸的分类; 氨基酸的理化性质、成肽反应及体内重要的生物活性肽; 蛋白质的分类及分子结构; 蛋白质的结构(包括一级结构与空间结构与功能的关系; 蛋白质的理化性质、分离纯化的基本方法及其原理; 蛋白质一级结构的测定(即多肽链中氨基酸序列分析和空间结构的测定。 重点: 氨基酸的分类及理化性质,蛋白质的一级和空间结构及其与功能的关系,分离纯化蛋白质的原理和方法。 难点: 蛋白质一级结构的测定,这也是众多研究者花费多年才解决的难题,我们只需弄清楚其要步骤及各步的基本原理和方法即可。 基本知识与理论: 一、蛋白质的生物学功能(了解即可 蛋白质是生命的物质基础,没有蛋白质就没有生命,生物体结构越复杂,其蛋白质种类和功能越繁多,其主要的生物学功能是: (一催化和调节能力 某些蛋白质是酶,催化生物体内的物质代谢反应。 某些蛋白质是激素,具有一定的调节功能,如胰岛素调节糖代谢、体内信号转导也常通过某些蛋白质介导。 (二转运功能 某些蛋白具有运载功能,如血红蛋白是转运氧气和二氧化碳的工具,血清白蛋白可以运输自由脂肪酸及胆红素等。 (三收缩或运动功能 某些蛋白质赋予细胞与器官收缩的能力,可以使其改变形状或运动。如骨骼肌收缩靠肌动蛋白和肌球蛋白。 (四防御功能 如免疫球蛋白,可抵抗外来的有害物质,保护机体。 (五营养和储存功能 如铁蛋白可以储存铁。 (六结构蛋白 许多蛋白质起支持作用,给生物结构以强度及保护,如韧带含弹性蛋白,具有双向抗拉强度。 (七其他功能 如病毒和噬菌体是核蛋白,病毒可以致病。 二、蛋白质的分子组成 (一元素组成 组成蛋白质分子的主要元素有碳、氢、氧、氮、硫。有些还含有少量磷或金属元素。各种蛋白质的含氮量很接近,平均为16%,且蛋白质是体内的主要含氮物,因此可以根据生物样品的含氮量推算出蛋白质的大致含量。 (二氨基酸 氨基酸是蛋白质的基本组成单位,存在于自然界的氨基酸有300余种,但组成人体蛋白质的氨基酸仅有20种,且均属L-α-氨基酸(甘氨酸除外即左旋氨基酸,因为甘氨酸无手性碳原子(与四个不同的原子或基团相连的碳原子,大多数有手性碳原子的是手性分子,手性分子有旋光活性。根据它们的侧链R的结构和性质可分为四类: 1.非极性疏水性氨基酸:这类氨基酸的特征是在水中的溶解度小于极性氨基酸。 2.极性中性氨基酸: 这类氨基酸的特征是比非极性氨基酸易溶于水,且羧基数等于氨基数,故为中性氨基酸,但因为羧基电离能力较大,故其实际上具有弱酸性。 3.酸性氨基酸:天冬氨酸、谷氨酸。这两种氨基酸都含有两个羧基,在生理条件下带负电,故为酸性氨基酸。 4.碱性氨基酸:赖氨酸、精氨酸和组氨酸。这类氨基酸在生理条件下带正电,故为碱性氨基酸。 还需要记住这20种氨基酸的英文缩写符号,尤其是三字符号,并且这四种类别的氨基酸中还有几种特殊的氨基酸,也需记住它们的独特特征。 它们是芳香族氨基酸:苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸分子中含有芳香环 含硫氨基酸:甲硫氨酸、半胱氨酸分子中含硫元素,甲硫氨酸也叫蛋氨酸。 亚氨基酸:脯氨酸,其氨基处于环中,为亚氨基酸 支链氨基酸:缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸,这三种均含有支链 其中有八种氨基酸人体内不能自身合成,必须从食物中获得,称为必需氨基酸,它们是缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸和色氨酸。 三、氨基酸的理化性质 (一两性电离及等电点 氨基酸分子中含有碱性的α-氨基和酸性的α-羧基,能与酸或碱类物质结合成盐,故它是一种两性电解质。在某一pH值的溶液中氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势与程度相等,成为兼性离子,呈电中性,此时溶液的pH称为该氨基酸的等电点(pI。这里有一个等电点的计算问题: 1.侧链R为非极性基团或虽为极性但不解离的,此种氨基酸的等电点主要由α-氨基和α-羧基的解离常数的负对数pK1,pK2决定,pI=1[]2(pK1+pK2 2.侧链基团可以解离,则由α-氨基,α-羧基及R基团解离情况共同决定,只需写出电离式,取其兼性离子两边的pK值的平均值即可。如赖氨酸其电离式为: 由电离式可以看出,其兼性离子两边pK值分别是pKα-NH3+和pKε-NH3+而与α-羧基无关故其pI=1[]2(8.95+10.537=9.74 (二紫外吸收性质 色氨酸、酪氨酸在280nm波长附近有最大的紫外吸收峰,由于大多数蛋白质含有这类氨基酸,所以测定蛋白质溶液280nm的光吸收值,是分析溶液中蛋白质含量的快速简便方法。 (三茚三酮反应:氨基酸+茚三酮水合物→还原茚三酮+氨,还原茚三酮+氨+茚三酮→蓝 紫色化合物 此化合物最大吸收峰在570nm波长处,由于此吸收峰值的大小与氨基酸释放出的氨量成正比,因此可以作为氨基酸定量分析的方法。 四、