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发酵豆粕中水溶性蛋白含量 的测定
1 方法原理
用水提取大豆中的水溶性蛋白，硫酸使含氮物转化成为硫酸铵，加强碱蒸馏
使氨逸出，用硼酸吸收后，用标准盐酸滴定计算含氮量，乘以换算系数计算出大
豆中水溶性蛋白的含量。
2、试剂
除非另有说明，在分析中仅使用确认的分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相
当纯度的水。
2.1 硫酸 （H SO ）。
2 4
2.2 盐酸 (HCl)。
2.3 20g/L 硼酸溶液：称取 100g 硼酸（H BO ）溶于5000mL 水中。
3 4
2.4 400g/L 氢氧化钠溶液：称取 2000g 氢氧化钠（NaOH）溶于 5000mL 水中。
2.5 盐酸标准溶液[c(HCl)=0.1mol/L]：量取 8.3mL 盐酸，溶于 1000mL 水中。
标定：精密称取经 270℃～300℃干燥恒重过的基准碳酸钠约 0.15g，加水
50mL 溶解，加甲基红—溴甲酚绿混合指示剂 10 滴，用本液滴定到溶液由绿色变
为紫红色。煮沸 2min，冷却至室温， 继续滴定到溶液由绿色变为暗紫色，同时
做空白试验。
盐酸标准溶液的浓度按式（1）计算：
m
C ………………………………………………(1)
( )
V1− V2 × 0.0530
式中：
m—无水碳酸钠的质量，单位为克（g）；
V —盐酸溶液用量，单位为毫升（mL）；
1
V —空白试验盐酸溶液用量，单位为毫升（mL）；
2
0.0530—Na CO 的毫克当量。
2 3
2.6 混合指示剂。
1.0g/L 甲基红乙醇溶液：称取0.1g 甲基红溶于 100mL 乙醇中；5.0g/L 溴
甲酚绿乙醇溶液：称取0.5g 溴甲酚绿溶于 100mL 乙醇中；两溶液等体积混合，
在阴凉处保存期为 3 个月。
2.7 混合催化剂[ （CuSO +K SO ）=10+100]:称取 10g 硫酸铜（CuSO ·5H O）
4 2 4 4 2
和 100g 硫酸钾（K SO ）,混匀，研磨，过 0.42mm 筛。
2 4
2.8 硫酸铵。
3、仪器设备
3.1 实验室用样品粉碎机或研钵。
3.2 分样筛: 孔径 0.45mm(40 目)。
3.3 分析天平: 感量 0.0001g。
3.4 滴定管: 酸式, 25 或 10mL。
3.5 具塞三角瓶: 250mL。
3.6 恒温振荡器。
3.7 消煮炉或电炉。
3.8 凯氏烧瓶: 100或 500mL。
3.9 凯氏蒸馏装置: 常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。
3.10 三角瓶: 250mL。
3.11 容量瓶: 100mL。
3.12 消煮管：250 mL。
3.13 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪。
3.14 离心机。
3.15 中速定性滤纸。
4 操作步骤与计算
4.1 游离氨含量的测定
4.1.1 操作步骤
称取粉碎试样 3-5g （精确至0.01g）于 250mL 三角瓶中。吸取 100mL 20℃
蒸馏水于三角瓶中，振摇使试样不结块，均匀分散。 将三角瓶固定于摇床，温
度控制在 (20士 2)℃.，振荡 60 min。 取下三角瓶，将溶液用中速定性滤纸过
滤。过滤完毕后，取 10mL 上清液，上机蒸馏、滴定；或采用常量直接蒸馏式或
半微量水蒸气蒸馏式凯氏蒸馏装置蒸馏、滴定。
4.1.2 计算
游离氨含量（﹪）={[(V-V )×C×0.017×100]/(m ×10)}×100%
0
式中：
V——滴定样品消化液所耗盐酸标准溶液的体积，单位为毫升 (m
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