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现代组织化学技术 ( Modern Histochemical Technology ) 华中科技大学同济医学院 解剖学系组织胚胎学教研室 李宏莲 1 、 经典组织化学 2 、 免疫组织化学 3 、 原位杂交组织化学 现代组织化学的内容 组 织 化 学 ( 也称细胞化学 ) （ Histochemistry or cytochemistry ） 一、组织化学的基本概念 （ 一）组织化学的提出 （二）组织化学的定义 在保持 组织 或 细胞 基本上不改变其生活状 态时的微细结构的条件下，采用显微镜技术观 察某些 化学成分 或 酶活性 在组织或细胞内的 定 性 、 定位 和 定量 及其变化规律 定性，定位， 定量 ; 组织原位，显微镜 铅法（ ATP 酶） H - E 染色 醛复红染色 H - E 染色 （三）组织化学的基本原理 化学反应 化学试剂 + 拟检物质 反应产物沉淀 （有色） （组织切片或细胞涂片） （拟检物质所在处） 一、组织化学的基本概念 （四）组织化学技术的用途 一、组织化学的基本概念 1. 某些离子 : 钙离子、铁离子、磷酸根离子等 2. 糖类 : 过碘酸希父反应（ PAS 反应）可以显示多糖和糖蛋白的糖链 糖 多醛 紫红色反应产物 过碘酸 品红硫酸复合物 无色，即希夫试剂 （四）组织化学技术的用途 一、组织化学的基本概念 3. 脂类 : 甲醛固定，冰冻切片，用油红 O 、尼罗蓝或苏丹类脂溶性染料 染色，可呈现相应颜色 4. 核酸 : DNA 显示：福尔根反应 —— 稀盐酸水解 DNA ，再用希夫试剂 处理，形成紫红色产物 DNA 和 RNA 同时显示：甲基绿 --- 派若宁 儿茶酚胺、蛋白质、氨基酸等等 5. 酶类 : 通过显示酶的活性来检测酶的存在。 常用光镜酶组织化学 显示法反应原理 酶组织化学基本反应原理 酶特异性底物 + 相关捕获剂 反应产物沉淀（ 有色 ） 反应产物沉淀（ 无色 ） + 置换剂 酶 （孵育液内） （组织细胞内） 镜下观察 有色沉淀 R-PO 4 Na 2 + H 2 O R-OH + CaHPO 4 CaHPO 4 Co 3 (PO4) 2 Co 3 (PO4) 2 CoS ↓ （显色） 1 、金属 - 金属盐显示法 方法 Ⅰ：钙 - 钴法 CaCl 2 酶作用 Co(NO 3 ) 2 (NH 4 ) 2 S （无色沉淀） 1 、金属 - 金属盐显示法 方法 Ⅱ：铅法 R-PO 4 Na 2 + H 2 O R-OH + PbHPO 4 PbHPO 4 PbS ↓ （显色） 酶作用 Pb 2+ (NH 4 ) 2 S 2 、偶联偶氮色素法 I 、 同时偶联法 ： 该法是 孵育液 中的 底物 被 酶 分解后所产生的 反应物沉淀立即与 重氮盐 形成 重氮化合物 的 偶氮 色素 而 显色 。 II 、 后偶联法 ： 该法是为了防止 重氮盐 对 酶 的抑制作用，而