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并购重组 重组蛋白的表达 重组蛋白的概述 1. 概述 分离纯化组成了基因工程的下游处理（downstream processing）阶段，这一过程又和上游过程 紧密相联系，上游过程的诸方面影响到下游的分离纯化，所以在进行目标蛋白质表达纯化时要统 一考虑和整体设计，并充分考虑上游因素对下游的影响，如是否带有亲和标签，是否进行分泌表 达。目前应用最广泛的表达系统有三大类，分别是大肠杆菌表达系统、酵母表达系统和 CHO 细胞 表达系统，不同的表达系统和培养方法显著影响下游的处理过程，目标蛋白表达是否形成包涵体， 目标蛋白表达的定位（胞内、细胞内膜、周质空间和胞外），蛋白表达的量都依赖于所选择的表 达系统。选择将所表达的蛋白分泌到细胞外或周质空间可以避免破碎细胞的步骤，并且由于蛋白 质种类少，目标蛋白容易纯化；而在细胞质内表达蛋白，可能是可溶性表达，可能形成包涵体， 可溶性的蛋白往往需要复杂的纯化步骤，而包涵体易于分离，纯度较高，但回收具有生物活性的 蛋白却变的相当困难，需要对聚集的蛋白进行变复性，通常活性蛋白的得率比较低，表 1 列出了 不同策略对表达、纯化的影响，对于其中的有些缺点可以通过一定的方法进行克服和避免，如利 用DNA 重