实验四花粉生活力的测情况.pdf

实验四、花粉生活力的测定 一、实验目的 ：通过实验掌握花粉生活力测定的具体技术和方法。 二、实验原理： 花粉生活力是指在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力。 花粉生活力测定在 杂交工作中很重要， 尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时， 花粉要经过一段较 长时间的贮藏运输过程， 因此在杂交前应检验花粉的生活力， 以免应用无生活力的花粉而造 成杂交工作的失败。 三、实验材料 ：苹果花粉 四、实验用具与试剂 ：指形管、显微镜、载玻片、盖玻片、凹式载玻片、滴瓶、培养皿、天 平、烧杯、玻璃棒、微波炉、滤纸、水浴锅、计数器、镊子；碘化钾（ KI ）、碘、蓝墨水、 蒸馏水、蔗糖、琼脂、硼酸等。 五、实验步骤 常用的测定花粉生活力的方法：形态观察法、碘 -碘化钾染色法、蓝墨水染色法和培养 基发芽法。 1. 形态观察法 直接在显微镜下观察花粉的形态，根据花粉的典型性（如具有正常的大小、 形状、 色泽 等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不 具有生活力。具体方法： 将花粉置于载玻片上，在显微镜下观察 3 个不同视野，要求被检查 的花粉粒总数达到 100 粒以上，计算正常花粉粒占总数的比率。 此法简便易行但 准确性差 ，一般只用于测定 新鲜花粉 的生活力。 2. 染色法 (1) 碘 -碘化钾染色法 ① 原理： 正常的花粉积累淀粉较多， 而不正常的花粉则少。据此， 可用化学物质染色， 根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别。通常正常花粉用 I-KI 染色 后呈 蓝色 ，而发育不良畸形花粉则不积累淀粉，当 I-KI 染色时呈 黄褐色 。 ② I-KI 溶液： 取 2.0 g KI 溶于 5～ 10mL 蒸馏水中， 然后加入 1.0 g I2 待全部溶解后， 再 加蒸馏水至 200mL ，贮于棕色瓶中备用。 ③ 具体方法：取少量花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，再加一 滴 I-KI 溶液，盖上盖玻片置于显微镜下观察。凡被染色呈蓝色表示具有生活力，呈黄褐色 者为发育不良生活力弱的花粉。 为了保证实验的准确性， 要求观察不同的 3 个视野， 求其平 均值，统计花粉生活力。 (2) 蓝墨水染色法 ① 蓝墨水溶液：正常购买的蓝墨水稀释 10 倍。 ② 具体方法：取少量花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，再加一 滴蓝墨水溶液， 盖上盖玻片置于显微镜下观察。 凡被染色呈 无色 时表示具有生活力， 呈 蓝黑 色者为发育不良生活力弱的花粉。 为了保证实验的准确性， 要求观察不同的 3 个视野， 求其 平均值，统计花粉的生活力。 3. 培养基发芽法： 人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱。 (1) 培养基的制作与接种 10%蔗糖 +0.01% 硼酸 +1%琼脂，溶于蒸馏水中，加热煮沸即可。将配好的培养基保持在 40℃的水浴锅中保温， 即不凝固。 用玻璃棒蘸一滴培养基滴在载玻片的凹玻片内， 然后用头 发沾少量花粉条播。 将载玻片放在垫有湿润滤纸的培养皿内或倒扣在培养皿上， 并贴上标签 （花粉品种名称、姓名和日期） ，将培养皿放于 25℃暗培养 24h 后统计发芽率。 (2) 观察记数 在显微镜下观察，每品种观察不同的