LTA-sa对奶牛乳腺上皮细胞中乳蛋白合成及相关信号通路的影响.pdfVIP

目 录 目 录 摘 要I Abstract III 1 文献综述 1 1.1 乳蛋白概述 1 1.1.1 乳蛋白的组成 1 1.1.2 乳蛋白的合成方式2 1.1.3 调控乳蛋白合成的信号转导通路2 1.2 脂磷壁酸的研究进展4 1.2.1 LTA 的来源与结构4 1.2.2 LTA 诱导的炎症反应4 1.2.3 LTA-sa 激活的炎症信号通路 5 1.2.4 NF-κB 信号通路与JAK-STATs 之间的关系 6 1.3 目的与意义 7 2 材料与方法 9 2.1 BMECs 的原代分离培养及纯化 9 2.1.1 材料 9 2.1.2 方法 11 2.2 LTA-sa 最适刺激浓度及PDTC 与stattic 最佳抑制浓度的确定 15 2.2.1 材料 15 2.2.2 方法 16 2.3 LTA-sa 对泌乳通路JAK2-STAT5 及CSN2 表达的影响 19 2.3.1 材料 19 2.3.2 方法20 3. 结果与分析23 3.1 BMECs 的分离纯化与鉴定23 3.1.1 BMECs 的原代培养23 3.1.2 BMECs 的纯化与鉴定23 3.1.3 BMECs 中CSN2 表达能力的检测24 i LTA-sa 对奶牛乳腺上皮细胞中乳蛋白合成及相关信号通路的影响 3.2 LTA-sa、PDTC 和stattic 处理浓度的确定 25 3.2.1 LTA-sa 最适处理浓度的确定 25 3.2.2 PDTC 处理浓度的确定 27 3.2.3 stattic 处理浓度的确定 28 3.3 LTA-sa 对JAK2-STAT5 泌乳信号通路及CSN2 合成的影响 29 3.3.1 LTA-sa 对SOCS3 和CSN2 mRNA 相对表达水平的影响 29 3.3.2 LTA-sa 对NF-κB p65 蛋白相对表达水平的影响 30 3.3.3 LTA-sa 对p-STAT3 和SOCS3 蛋白相对表达水平的影响 31 3.3.4 LTA-sa 对p-JAK2 、p-STAT5 和CSN2 蛋白相对表达水平的影响 31 3.4 抑制NF-κB 途径后LTA-sa 对JAK2-STAT5 泌乳信号通路及CSN2 合成的影响 32 3.4.1 PDTC+LTA-sa 对SOCS3 和CSN2 mRNA 相对表达水平的影响 32 3.4.2 PDTC+LTA-sa 对NF-κB p65 蛋白相对表达水平的影响 33 3.4.3 PDTC+LTA-sa 对p-STAT3 和SOCS3 蛋白相对表达水平的影响 34 3.4.4 PDTC+LTA-sa 对p-JAK2 、p-STAT5 和CSN2 蛋白相对表达水平的影响 35 3.5 抑制STAT3 激活后LTA-sa 对JAK2-STAT5 泌乳信号通路及CSN2 合成的影响 36 3.5.1 stattic+LTA-sa 对SOCS3 和CSN2 mRNA 相对表达水平的影响 36 3.5.2 stattic+LTA-sa 对p-STAT3 蛋白相对表达水平的影响 37 3.5.3 stattic+LTA-sa 对p-p65 和SOCS3 蛋白相对表达水平的影响 38 3.5.4 stattic+LTA-sa 对p-JAK2 、p-STAT5 和CSN2 蛋白相对表达水平的影响 39 3.6 LTA-sa、PDTC+LTA-sa 及stattic+LTA-sa 对BME