小豆感染豇豆单胞锈菌的早期分子检测及差异表达蛋白鉴定.pdf

目录 目 录 摘 要I Abstract III 1 文献综述 1 1.1 小豆及小豆锈病研究概况 1 1.2 植物病原菌检测技术的发展及应用2 1.2.1 传统检测方法2 1.2.2 免疫学检测技术2 1.2.3 分子检测技术3 1.3 植物抵抗病原菌侵染的机制5 1.3.1 植物防御酶系统在植物抗病中的作用5 1.3.2 植物病程相关蛋白在植物抗病中的作用5 1.3.3 植物次生代谢物在植物抗病中的作用6 1.3.4 DIR 蛋白在植物抗病中的作用7 1.4 蛋白质组学及其在植物-病原菌互作中的应用8 1.5 本研究的目的意义9 2 材料与方法 11 2.1 供试材料 11 2.1.1 供试小豆品种及病原菌 11 2.1.2 主要试剂 11 2.1.3 主要仪器设备 11 2.2 试验方法 12 2.2.1 小豆感染豇豆单胞锈菌的早期分子检测体系构建及应用 12 2.2.2 小豆抗病品种响应锈菌侵染的蛋白质组学分析 15 2.2.3 小豆DIR 蛋白编码基因响应锈菌侵染的表达模式分析 18 3 结果与分析 19 3.1 小豆感染豇豆单胞锈菌的早期分子检测体系构建及应用 19 3.1.1 豇豆单胞锈菌特异性引物筛选 19 I 小豆感染豇豆单胞锈菌的早期分子检测及差异表达蛋白鉴定 3.1.2 小豆锈菌巢式PCR 检测体系构建20 3.1.3 小豆锈菌巢式PCR 检测体系灵敏度测定21 3.1.4 小豆锈菌巢式PCR 检测体系的初步应用21 3.2 小豆抗病品种响应锈菌侵染的差异表达蛋白鉴定22 3.2.1 测序样品蛋白质的质量检测23 3.2.2 小豆叶片蛋白的鉴定及功能注释24 3.2.3 小豆响应锈菌侵染的差异表达蛋白鉴定及功能分析29 3.2.4 锈菌侵染对小豆防卫反应相关蛋白表达的影响37 3.2.5 小豆抗锈病相关蛋白筛选39 3.3 小豆DIR 蛋白编码基因在锈菌侵染过程中的表达模式分析40 4 讨论43 4.1 小豆感染豇豆单胞锈菌的早期分子检测体系的构建及应用43 4.2 小豆响应锈菌侵染的差异表达蛋白鉴定及功能分析44 4.3 DIR 蛋白编码基因在锈菌侵染过程中的表达模式分析47 5 结论49 参 考 文 献51 致 谢59 个人简历61 II Contents Contents Abstract in Chinese I Abstract in English III 1 Introduction 1 1.1 Research status of adzuki bean and adzuki bean rust 1 1.2 Development and application of detection technology for plant pathogens 2 1.2.1 Traditional detection methods 2 1.2.2 Immunological detectio