蛋白纯化-Ni亲和层析柱法.docVIP

. Ni亲和层析柱法纯化带组氨酸标签的重组蛋白 纯化设备： 纯化仪：?KTA purifier(GE Healthcare, Uppsala, Sweden) TM HP-5 mL (GE Healthcare, , Uppsala, Sweden) HisTrapNi亲和层析柱：试剂： 所有上柱的试剂均需经0.2 μM孔径过滤器过滤并超声波震荡除气处理方可使用。 Binding Buffer：20 mM NaHPO-NaHPO, pH 7.4, 500 mM NaCl, 5 mM 咪唑 4224Elution Buffer：20 mM NaHPO-NaHPO, pH 7.4, 500 mM NaCl, 500 mM 咪唑 4242Stripping Buffer: 20 mM NaHPO-NaHPO, pH 7.4, 500 mM NaCl, 50 mM EDTA 442220%乙醇：200 mL无水乙醇，加蒸馏水定容至1L 0.1M NiSO: 称取2.6284g NiSO·6HO，加蒸馏水溶解，定容至100 mL 244操作步骤： 1 样品前处理 取诱导后菌液50 mL，4℃、5000 rpmin离心10 min收集菌体，以25 mL Binding Buffer重悬