禾谷镰刀菌内吞蛋白Edel的功能研究.pdfVIP

符号说明 Amp+:Ampicillin, 氨苄青霉素 CA:Carrot agar, 胡萝 卜培养基 cDNA:complementary DNA, 互补脱氧核糖核酸 CMC:Carboxymethyl cellulose, 羧甲基纤维素 CTAB:Hexadecyltrimethyl ammoniumBromide, 十六烷基三甲基溴化铵 ddH O:Doubledistilledwater，双蒸水 2 DEPC:Diethylpyrocarbonate, 焦碳酸二乙酯 DNA:Deoxyribonucleic acid, 脱氧核糖核酸 DON:Deoxynivalenol, 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 Ede1 EH domain-containingand endocytosisprotein 1 ： FHB:Fusariumheadblight, 小麦赤霉病 G418:Geneticin, 遗传霉素 GAPDH:Glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase, -3- 甘油醛 磷酸脱氢酶 LB:Luria-bertanimedium,LB 培养基 PDA:Potatodextroseagar, 马铃薯培养基 PEG:Polyethyleneglycol, 聚乙二醇 qRT-PCR:Quantitivereal-timepolymerasechainreaction, 实时荧光定量PCR RNA:Ribonucleicacid, 核糖核酸 RT-PCR:Reversetranscriptasepolymerasechain reaction, 反转录PCR SDS:Sodium dodecyl sulfate, 十二烷基硫酸钠 CMAC:7- -4- 氨基 氯甲基香豆素 FM4-64:N-(3-triethylammoniumpropyl)-4-(p-diethylaminophenyl-hexatrienyl) PVDF:Polyvinylidenedifluoride，膜 聚偏二氟乙烯膜- 目录 中文摘要I 英文摘要II 1 前言1 1.1禾谷镰刀菌1 1.1.1 禾谷镰刀菌生物学特征1 1.1.2 禾谷镰刀菌与DON 毒素2 1.1.3 小麦赤霉病的症状2 1.2 小麦赤霉病的防治3 1.3 内吞作用的研究进展3 1.3.1 内吞作用在植物细胞中的研究进展4 1.3.2 内吞作用在酵母中的研究进展4 1.3.3 内吞作用在丝状真菌中的研究进展5 1.3.4 内吞作用的研究意义6 1.4 内吞蛋白Ede1 的研究进展6 1.5 研究目的和意义7 2 材料和方法8 2.1 实验材料8 2.1.1 主要软件8 2.1.2 主要数据库8 2.1.3 菌株和载体8 2.1.4 工具酶和主要试剂8 2.1.5 主要培养基配方9 2.1.6 主要溶液和缓冲液配方12 2.1.7PCR 引物16 2.2 实验方法17 2.2.1 禾谷镰刀菌Ede1基因的生物信息学分析 17 2.2.2 菌种的活化与保存18 2.2.3CTAB 法提取DNA18 2.2.4RNA 提取19 2.2.5cDNA 链合成19 2.2.6 质粒DNA 的提取20 2.2.7 构建敲除片段20 单片段的扩增20 A-H1片段和H2-B 片段的连接21 2.2.8 原生质体制备和转化22 2.2.9 转化子的PCR 验证23 2.2.10 转化子的Southernblot 验证23 2.2.11 目的基因的回复23 构建回补载体23 FgEde1-C 回复菌株的验证25 2.2.12 禾谷镰刀菌FgEde1基因敲除突变体的表型分析25 菌落形态的观察25 无性生殖阶段的测定与观察25 .1 分生孢子产量的测定与形态观察25 .2 孢子萌发观察25 有性生殖观察26 致病性测定26 .1.小麦穗致病性的观察26 .2.小麦胚芽鞘致病性的观察27 DON 毒素产量的测定27 .1 大米粒中DON 毒素的测定27 .2 采用呕吐毒素检测试剂盒检测DON 毒素28