谷子黄叶突变体T182基因的图位克隆与功能研究.pdfVIP

符 号 说 明 SAMS:S-adenosylmethionine synthetase, S-腺苷甲硫氨酸合成酶 SAM:S-adenosylmethionine, S-腺苷甲硫氨酸 Met:L-Methionine,L-甲硫氨酸 EMS:ethylmethyl sulfonate, 甲基磺酸乙酯 PS:phytosiderophore, 植物铁载体 NAS:nicotianamne synthase, 尼克烟酰胺合成酶 MA:mugineic acid, 麦根酸 DMA:2’-deoxymugineic acid, 脱氧麦根酸 NA:nicotianamne, 烟草胺 CRISPR-Cas9: clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated protein 9, 规律成簇的间隔短回文重复和相关蛋白9 BSC:bundle sheath cell, 维管束鞘细胞 MC:mesophyll cell, 叶肉细胞 Thy:Thylakoidlamellae, 类囊体片层 GFP:green fluorescentprotein, 绿色荧光蛋白 RNA-seq:RNA sequencing, 转录组测序 DEG:differentially expressedgene, 差异表达基因 GO:GeneOntology, 基因本体论 （聚类分析） KEGG:KyotoEncyclopediaofGenesand Genomes, 京都基因与基因组百科全书 （系统分 析基因功能、基因组信息数据库） BP:biologicalprocess, 生物学过程 MF:molecular function, 分子功能 FDR:faulsediscoverrate, 错误发生率 目录 中文摘要1 Abstract3 1前言5 1.1叶色突变体的研究进展5 1.1.1叶色突变体的来源5 1.1.2 叶色突变体的性状表现6 叶色的变化6 叶绿素的含量7 叶绿体的结构7 光合特性7 1.1.3 叶色突变形成的因素8 环境因素8 遗传因素8 1.2 S-腺苷甲硫氨酸合成酶研究进展10 1.2.1S-腺苷甲硫氨酸合成酶11 1.2.2 SAM 在植物中的作用12 SAM 作为甲基供体参与多个生理过程12 SAM 参与多胺的合成12 SAM 参与麦根酸的合成12 SAM 参与乙烯的合成12 1.3植物缺铁研究进展13 1.3.1铁的生物学功能13 1.3.2 植物铁元素的吸收方式14 机理Ⅰ吸收机制——还原机制 14 机理Ⅱ吸收机制——螯合机制15 1.3.3铁在植物体内的运输16 1.3.4 植物缺铁的表现形式17 缺铁响应基因的表达17 1.4 谷子叶色突变体18 1.5本研究的意义19 2试验材料与方法20 2.1试验材料与种植条件20 2.2 农艺性状的调查20 2.3 叶绿素含量的测定21 2.4 光合参数的测定21 2.5透射电镜观察叶绿体超微结构22 2.6 突变基因的图位克隆22 2.6.1遗传分析22 2.6.2 谷子叶片DNA 的提取22 2.6.3 突变基因的初定位23 2.6.4 突变基因的精细定位24 2.6.5候选基因的预测与测序25 2.7 生物信息学分析26 2.8载体的构建26 2.8.1亚细胞定位载体的构建26 2.8.2 CRISPR-Cas9载体的构建28 2.8.3 回补载体的构建29 2.9亚细胞定位分析29 2.10基因表达检测31 2.10.1RNA 的提取与反转录31 2.10.2 荧光定量PCR32 2.11铁含量测定33 2.12 水培缺铁试验34 2.13 离体叶片衰老实验34 2.14 转录组分析34 3 结果与分析35 3.1突变体T182 的生理生态特征分析35 3.1.1T182 的表型特征分析35 3.1.2 T182 突变体影响谷子的农艺性状37 3.1.3 T182 突变体影响谷子的光合作用38 3.1.4 T182 突变体影响谷子的叶绿体结构39 3.2 T182 突变基因的图位克隆42 3.2.1突变基因的遗传分析42 3.2.2 突变基因的初定位42 3.2.3 突变基因的精细定位43 3.2.4 候选基因的确定4