腐败梭菌胶体金试纸条检测方法的建立及类毒素疫苗的制备和应用.pdfVIP

符 号 说 明 bp: base pair, 碱基对 ELISA: the enzyme-linked immunosorbent assay, 酶联免疫吸附实验 GPI lycosylphosphatidylinositol, : g 糖基磷脂酰肌醇 h hour, : 小时 HRP: horseradishi peroxidase, 辣根过氧化物酶 IgG mmunoglobulin G , G : i 免疫球蛋白 kDa: kilodalton, 道尔顿 kg: kilogram, 千克 MBP maltose binding protein, : 麦芽糖结合蛋白 min: minute, 分钟 MLD minimum lethal dose, : 最小致死量 mL: militer, 毫升 NC nitrocellulose membrane, : 硝酸纤维素膜 ng: nanogram, 纳克 OD optical density, : 吸光度 PAGE: polyacrylamide gel electropHoresis, 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PCR polymerase chain reaction, : 聚合酶链式反应 pH: potential of hydrogen, 酸碱度 ROS: reactive oxygen species, 活性氧物质 rpm: round per minute, 每分钟转速 SDS sodium dodecyl sulfate, : 十二烷基硫酸钠 TMB: tetramethylbenzidine , 四甲基联苯胺 μL: microliter, 微升 µg microgram, : 微克 目 录 中文摘要I 英文摘要III 1 前言1 1.1 腐败梭菌研究概况1 1.1.1 腐败梭菌简介1 1.1.2 腐败梭菌生长特性1 1.1.3 腐败梭菌致病机制1 1.1.4 α 2 腐败梭菌 毒素 1.2 羊快疫概述3 1.2.1 羊快疫简介3 1.2.2 羊快疫的诊断4 1.2.3 羊快疫的预防和治疗5 1.3 胶体金免疫层析试纸条6 1.3.1胶体金层析技术简介6 1.3.2 胶体金层析技术原理6 1.3.3胶体金免疫层析试纸条的分类7 1.3.4 胶体金层析技术的应用7 1.4 羊快疫疫苗的研究进展8 1.4.1制苗培养基及培养方法8 1.4.2 制苗佐剂研究概况9 1.5 本研究的目的及意义10 2 材料与方法10 2.1 实验材料10 2.1.1 实验动物、菌株及血清10 2.1.2 实验所需试剂、材料及引物10 2.1.3 主要试剂的配制方法11 2.1.4 主要试验仪器12 2.2 方法13 2.2.1腐败梭菌培养条件的摸索13 2.2.1.1 腐败梭菌培养基的选择13 2.2.1.2 腐败梭菌培养环境的选择13 2.2.1.3 腐败梭菌培养最适pH 摸索13 2.2.1.4 腐败梭菌产毒条件摸索14 2.2.2 腐败梭菌多克隆抗体的制备14 2.2.2.1 腐败梭菌菌体总蛋白的获取14 2.2.2.2 腐败梭菌多克隆抗体免疫过程15 2.2.2.3 兔血清抗体效价检测15 2.2.2.4 抗体的纯化16 2.2.2.5纯化后抗体效价检测16 2.2.3 腐败梭菌胶体金试纸条的制备16 2.2.3.1 抗体标记最适pH 的选择16 2.2.3.2 抗体最适标记量的选择17 2.2.3.3 胶体金探针的制备和纯化17 2.2.3.4 结合物原液工作浓度的确定