副猪嗜血杆菌脂多糖刺激猪肺泡巨噬细胞引起NLRP3的变化及其对NF-κB信号通路的影响.pdfVIP

符 号 说 明 bp: base pair，碱基对 cDNA:complementary DNA （与RNA），互补的DNA dNTP:deoxyribonucleosidetriphosphate，脱氧核糖核普三磷酸 ELISA:enzymelinkedimmunosorbent assay，酶联免疫吸附实验 HPS:haemophilusparasuis，副猪嗜血杆菌 h:hour，小时 kDa:kilodalton，千道尔顿 IL-6:interleukin 6，白细胞介素-6 IL-lβ: interleukin lβ，白细胞介素-lβ IL-8:interleukin 8，白细胞介素-8 NLRP3:NOD-likereceptorprotein 3,NOD 样受体蛋白3 PAM:porcinealveolar mcrophagecell，猪肺泡巨噬细胞 LPS:lipopolysaccharide，脂多糖 min:minute，分钟 ML:milliliter，毫升 NF-κB:nuclear factor-kappaB，核因子κB PBS:phosphatebuffered solution，磷酸盐缓冲溶液 RT-PCR:reverasetranscriptpolymerasechainreaction，反转录聚合酶链反应 rpm:revolutionsper minute，转每分钟 sec:second, 秒钟 siRNA:smallinterferingRNA，小干扰RNA TNF-α:tumournecrosisfactor-α，肿瘤坏死因子-α TSA:tryptic soy agar，胰蛋白大豆琼脂 TSB:tryptic soybroth，胰蛋白大豆肉汤 μM:μmol，微摩尔 目 录 中文摘要Ⅰ AbstractⅢ 1 前言1 1.1 副猪嗜血杆菌的概述1 1.2 副猪嗜血杆菌的病原型态及培养特性1 1.3 副猪嗜血杆菌的血清学研究进展2 1.3.1 血清学分型2 1.3.2 分子生物学分型2 1.4 副猪嗜血杆菌致病机制5 1.4.1 副猪嗜血杆菌的毒力因子6 1.4.2 副猪嗜血杆菌逃避肺部的天然免疫7 1.5 副猪嗜血杆菌的临床症状及病理变化8 1.6 副猪嗜血杆菌诊断9 1.7 副猪嗜血杆菌的防控11 2 材料与方法12 2.1 材料12 2.1.1菌株12 2.1.2 主要试剂12 2.1.3 试验相关设备仪器13 2.2 试验方法13 2.2.1 副猪嗜血杆菌脂多糖的提取、鉴定和保存13 2.2.2NLRP3抑制剂对副猪嗜血杆菌脂多糖刺激PAM 细胞IL-1β表达量的影响14 2.2.3TLR4 对副猪嗜血杆菌脂多糖刺激PAM 细胞NF-κB 信号通路的影响18 3 结果与分析20 3.1 副猪嗜血杆菌脂多糖的提取、鉴定和保存20 3.1.1 副猪嗜血杆菌脂多糖的纯化结果20 3.1.2 副猪嗜血杆菌脂多糖的定性试验结果20 3.1.3 副猪嗜血杆菌脂多糖中多糖含量测定20 3.1.4 副猪嗜血杆菌脂多糖的核酸含量测定21 3.1.5 副猪嗜血杆菌脂多糖的琼脂糖凝胶电泳鉴定结果21 3.1.6 副猪嗜血杆菌脂多糖的银染鉴定结果22 3.2NLRP3抑制剂对副猪嗜血杆菌脂多糖刺激PAM 细胞IL-1β表达量的影响22 3.2.1IL-1β、NLRP3表达量结果与分析22 3.3TLR4 对副猪嗜血杆菌脂多糖刺激PAM 细胞NF-κB 信号通路的影响23 3.3.1 细胞质中IκB、p65表达量结果与分析23 3.3.2 细胞质中p-IκB、p-p65表达量结果与分析24 3.3.3 细胞核中p-p65表达量结果与分析26 4 讨论27 4.1 副猪嗜血杆菌脂多糖的提取、鉴定和保存27 4.2NLRP3抑制剂对副猪嗜血杆菌脂多糖刺激PAM 细胞IL-1β表达量的影响27 4.3TLR4 对副猪嗜血杆菌脂多糖刺激PAM 细胞NF-κB 信号通路的影响27 5 结论29 参考文献30 致谢37 参与课题情况38 攻读硕士学位期间发表的学术论著39 山东农业大学硕士专业学位论文 中文摘要 Haemoph