桑树生长素早期响应基因Mul-SAUR15的功能研究.pdfVIP

符 号 说 明 bp: Base pair, 碱基对 CTAB: Cetyl trimethylammol lonium bromide, 十六烷基三甲基溴化铵 ddH O: Distilledant deionized water, 重蒸去离子水 2 dNTP: Deocy-ribonucleoside triphosphate, 脱氧核糖核苷三磷酸 EDTA: Ethylene diamine tetracetic acid, 乙二胺四乙酸 LB: Luria-bertani medium, LB 培养基 NCBI: National centre for biotechnology information, 国立生物技术信息中心（美国） PCR: Polymerase chain reaction, 聚合酶链式反应 qRT-PCR: Real time quantitative reverse transcription PCR, 实时定量反转录PCR SAUR: Small auxin-up RNA 目录 中文摘要I Abstract III 1 前言 1 1.1 植物生长素研究进展 1 1.1.1 生长素的生理作用 1 1.1.2 生长素的信号通路 2 1.1.3 植物生长素响应基因 3 1.2 Small auxin-up RNA (SAUR)基因研究进展 6 1.2.1 SAUR 基因的功能 7 1.2.2 SAUR 基因的作用机制 8 1.3 研究的目的和意义 10 2 材料与方法 11 2.1 材料 11 2.1.1 植物材料 11 2.1.2 菌株和载体 11 2.1.3 试剂 11 2.1.4 引物 11 2.1.5 仪器 12 2.2 方法 12 2.2.1 Mul-SAUR15 基因的克隆 12 桑树叶片RNA 的提取 12 cDNA 的反转录 13 Mul-SAUR15 基因的扩增 13 目的片段的回收 14 目的片段与克隆载体的连接 14 连接产物转化大肠杆菌 14 阳性质粒的鉴定和测序 15 2.2.2 Mul-SAUR15 基因的生物信息学分析 15 2.2.3 Mul-SAUR15 基因启动子的克隆 15 桑树叶片DNA 的提取 16 启动子的克隆 16 2.2.4 启动子的序列分析 16 2.2.5 Mul-SAUR15 基因启动子的表达活性分析 16 Mul-SAUR15 基因启动子表达载体的构建 17 启动子转基因拟南芥的筛选 18 Mul-SAUR15 基因启动子的瞬时表达活性分析 19 2.2.6 Mul-SAUR15 基因启动子的稳定表达活性分析 20 生长素诱导表达活性分析 20 不同生长阶段的表达活性分析 20 组织表达活性分析 20 2.2.7 Mul-SAUR15 基因的组织表达特性分析 21 2.2.8 Mul-SAUR15 基因的功能分析 21 Mul-SAUR15 基因表达载体构建 21 转Mul-SAUR15 基因拟南芥的筛选和鉴定 21 转Mul-SAUR15 基因拟南芥对生长素的敏感性分析 21 转Mul-SAUR15 基因拟南芥的表型分析 22 转基因拟南芥对Pst . DC3000 的抗性分析 22 转基因拟南芥的耐盐性分析 22 转基因拟南芥的抗旱性分析 22 3 结果与分析 23 3.1 Mul-SAUR15 基因的克隆与生物信息学分析 23 3.1.1 Mul-SAUR15 基因的克隆 23 3.1.2 Mul-SAUR15 蛋白质的结构预测 23 3.1.3 Mul-SAUR15 蛋白质的基本理化性质分析 25 3.1.4 Mul-SAUR15 的同源比较及其进化分析 26 3.2 Mul-SAUR15 基因启动子克隆与序列分析 27 3.2.1 Mul-SAUR15 基因启动子克隆 27 3.2.2 Mul-SAUR15 基因启动子的序列分析 28 3.3 Mul-SAUR15 基因启动子的表达活性分析 30 3.3.1 Mul-SAUR15