基因工程试题（附答案）全集.pdfVIP

作业一： 一、名词解释： 1、基因：是遗传的物质基础，是DNA （脱氧核糖核酸）分子上具有遗传信息的特定核苷酸序列的总称，是具有遗传 效应的 DNA 分子片段。 2、基因组该指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA 分子 3、操纵子:原核生物的几个功能相关的结构基因往往排列在一起，转录生成一个 mRNA，然后分别翻译成几种不同的 蛋白质。这些蛋白可能是催化某一代谢过程的酶，或共同完成某种功能。这些结构基因与其上游的启动子，操纵 基因共同构成转录单位，称操纵子。 4、启动子:是 RNA 聚合酶结合位点周围的一组转录控制组件，包括至少一个转录起始点。在真核基因中增强子和启动 子常交错覆盖或连续。有时，将结构密切联系而无法区分的启动子、增强子样结构统称启动子。 5、增强子:是一种能够提高转录效率的顺式调控元件，最早是在 SV40 病毒中发现的长约 200bp 的一段DNA，可使旁 侧的基因转录提高 100 倍，其后在多种真核生物，甚至在原核生物中都发现了增强子。增强子通常占 100～200bp 长度，也和启动子一样由若干组件构成，基本核心组件常为 8～12bp，可以单拷贝或多拷贝串连形式存在。 6、基因表达：是指细胞在生命过程中，把储存在DNA 顺序中遗传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白 质分子。 二、简答题 1、说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。 答：限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则,即属名+种名+株名的各一个首字母,再加上序号. 基本原则: 3-4个字 母组成,方式是:属名+种名+株名+序号; 首字母: 取属名的第一个字母,且斜体大写;第二字母: 取种名的第一个字母, 斜体小写;第三字母: (1)取种名的第二个字母,斜体小写;(2)若种名有词头,且已命名过限制酶,则取词头后的第一字 母代替.第四字母: 若有株名,株名则作为第四字母,是否大小写,根据原来的情况而定,但用正体. 顺序号: 若在同一 菌株中分离了几种限制酶,则按先后顺序冠以 I,Ⅱ,Ⅲ,… 等,用正体. 2、什么是限制性内切核酸酶的星号活性？受哪些因素影向？ 答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现 出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二 活性，而将这种因条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星号活性。 概括起来，诱发星活性的因素有如下几种： (1)高甘油含量(5％, v ／v)； (2)限制性内切核酸酶用量过高(100U／ugDNA)； (3)低离子强度 (25 mmol／L)； (4)高 pH(8.0 以上)；(5)含有有机溶剂，如 DMSO，乙醇等； (6)有非 Mg2+的二价阳离子存在(如 Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。 3、影响DNA 连接酶催化连接反应的因素有哪些？ 答：（1）DNA 的纯度 （2）DNA 甲基化的程度 （3）酶切消化反应的温度 （4）DNA 的分子结构 （5）核酸内切限制 酶的缓冲液 4、什么是Klenow 酶？有哪些活性？在基因工程中有什么作用？ 答：Klenow 酶是 1974 年 Klenow 用枯草杆菌蛋白酶水解 DNA 聚合酶 I，得到两个片段，其中大片段的分子量为 75kDa，它具有 5-3聚合酶和 3-5外切核酸酶的活性，小片段具有 5-3外切核酸酶活性。由于大片段失去了 DNA 聚合酶 I 中会降解 5引物的 5-3外切核酸酶的活性，所以在基因工程中更有用。 Klenow 酶主要有下列用途： (1)修复反应，制备平末端 可用 Klenow 酶修复限制性内切核酸酶或其他方法产生的 5或 3突出末端，制备平末端，这样可以使原来具有不 相容的黏性末端的 DNA 片段通过平末端重组。如在反应系统中加入放射性同位素标记的脱氧核苷酸，用这种末端填补 的方法可以制备 3末端标记的探针。 用 Klenow 酶修复 5突出末端的反应主要是利用了 Klenow 酶的 DNA 聚合酶活性，是填补反应；而修复 3突出末端 则是用 Klenow 酶的 3-5外切核酸酶的活性，是切割反应。用 Klenow 酶的切割反应来修复 3突出末端是不理想的， 改用 T4DNA 聚合酶或其他的酶是更好的选择。 (2) 标记 DNA3突出末端(protruding end) 该反应分两步进行：先用 3-5的外切核酸酶活性除去 3