人参SQS和SE酶基因的克隆及其表达载体的构建-最新资料.docVIP

人参SQS和SE酶基因的克隆及其表达载体的构建 　　GeneCloningofSQSandSEEnzymeandConstructionofExpressionVectorinGinseng 　　ZHANG Ming-zheWANG Zhen-huiZHANG Mei-pingWANG YiSUN Chun-yuJIANG Shi-cui 　　(Cell Engineering Lab,College of Life Sciences,Jilin Agricultural University,Changchun Jilin 130118) 　　AbstracSQS and SE are key enzymes of ginsenoside biosynthesis pathways. According to the SQS and SE accession number(AB010148 and AB122078)in GeneBank,which had been released,the corresponding sequences were researched and the specific primers were designed. Extracting total RNA from 5 years-old ginseng leaves,two genes of SQS and SE,which was about 1 440 bp and 1780 bp respectively,were successfully cloned using RT-PCR,by constructing of recombinant plasmid pMD18-T and sequencing analysis. At the same time,the expression vectors pCAMBIA1301-SQS andpCAMBIA1301-SE of these two genes were established,which would provide experimental materials for exploring the biosynthesis mechanism of triterpenoid saponins at the molecular level and the application of medicinal plants. 　　人参(Panax ginseng C.A.Mey.)为我国古老而名贵的药用植物,系五加科(Araliaceaae)人参属植物[1],是一种具有潜力的药用植物,在人类保健和医疗上应用广泛。医学和药理研究证明,人参皂苷为人参的主要有效成分之一,属于三萜类皂苷[2]。四环三萜类物质是以异戊二烯为基本结构单元,其合成符合异戊二烯合成途径。近年来研究表明,植物类异戊二烯的生物合成至少存在2条途径,即甲羟戊酸途径和丙酮酸/磷酸甘油醛途径[3,4]。大量文献报道,甲羟戊酸途径是皂苷三萜苷元合成必要途径[5]。目前对三萜皂苷的生物合成途径已有一些了解,研究证明三萜皂苷的合成首先通过甲羟戊酸途径合成2,3-氧化鲨烯,随后在氧化鲨烯环化酶(squalene oxide cyclase,OSC)的作用下形成各种三萜类。最后经细胞色素P450、糖基转移酶(GT)和β-糖苷酶的作用,形成各种类型的三萜皂苷(Dong et al.,2005)。 　　鲨烯合成酶(squalene synthase,SQS,EC 2.5.1.21)和鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE,EC 1.14.99.7)是异戊烯二磷酸转化2,3-氧化鲨烯过程中最关键的2个酶。异戊烯二磷酸依次在香叶二磷酸合成酶(GPS)、法尼基焦磷酸合成酶(FPS)、鲨烯合成酶(SQS)和鲨烯环氧酶(SE)的催化下最终合成2,3-氧化鲨烯。鲨烯合酶是催化两分子法尼基焦磷酸(Farnesyl pyrophosphate,FPP)缩合产生鲨烯(SQ)的关键酶,而鲨烯是生物合成萜、甾醇、胆固醇等萜烯类重要物质的共同前体[6]。有学者指出,鲨烯合酶催化萜烯类物质生物合成的第1个关键步骤。因而,鲨烯合酶的研究倍受重视,迄今人们已对人(Jayvardhan et al.,2000)等14个不同物种的鲨烯合酶进行了研究[7]。鲨烯环氧酶是一种单氧酶,它是三萜皂苷生物合成途径中的关键酶之一,催化鲨烯(squalene)合成2,3-氧化鲨烯(2,3-oxidosqualene)。其过渡产物是单氧态氧化鲨烯,单氧态氧化鲨烯是人参分子中一种高能氧态[8]。在紫外线和强光的刺激下,作为活性最高的中间产物之一的单氧态氧化鲨