低分子量壳聚糖纳米粒的制备及其对三七总皂苷肠道渗透性的影响.pdfVIP

摘 要 三七总皂苷（PNS ）是中药三七的主要活性成分之一，具有抗炎、抗衰老、 抗肿瘤、缓解心脑血管疾病等药理作用。PNS 中主要单体皂苷为水溶性大分子化 合物，难以透过肠黏膜，经口生物利用度低。壳聚糖作为带正电荷的天然氨基多 糖，具有良好的生物黏附性和打开肠上皮细胞间紧密连接的作用，促进药物经细 胞旁路吸收。为探究低分子量壳聚糖纳米粒（LMW-CTS-NPs ）对PNS 肠道渗透 性的影响，本论文主要进行如下研究工作： 1. 为确定高分子量的壳聚糖原料基本参数，以旋转粘度计、紫外分光光度计 和红外光谱仪进行表征，测得原料壳聚糖动力黏度为541.25±2.56 mPa ·s，脱乙酰 度为95.1±0.2 %，红外光谱图显示出壳聚糖特征吸收峰。为提升壳聚糖的流动性 和溶解性，采用酶法降解结合超滤分级分离技术清洁制备低分子量壳聚糖 （LMW-CTS ），渗透凝胶色谱测得其重均分子量为5760 Da，多分散系数为1.42， 分子量分布较窄。 2. 以LMW-CTS 为载体，三聚磷酸钠 （TPP ）为交联剂，调节二者浓度配比 确定离子凝胶法制备 LMW-CTS-NPs 的条件。对最优条件下制备的LMW-CTS- NPs 的粒度、电位、形貌和PNS 的包载能力进行表征，结果表明，其平均粒径为 115.5 nm，PDI 为0.221 ，表面Zeta 电位为+37.1 mV，形貌圆整、大小均匀；对 PNS 中不同组分显示出不同的包载能力，包封率范围为14.03 %~41.83 % ，载药 量范围为14.05 μg/mg~95.74 μg/mg 。此外，红外光谱确证纳米粒由壳聚糖和TPP 经离子键交联而成。 3. 建立Caco-2 细胞模型，检测跨膜电阻、碱性磷酸酶活力和标志物苯酚红 的渗透性，验证模型的完整性、分化特征、致密性和通透性。结果显示，培养至 2 21 d 时，跨膜电阻达682±66 Ω·cm ，肠腔侧和基底侧培养液碱性磷酸酶活力比达 -7 3.3，苯酚红在各取样时间点的表观渗透系数在(2.21±0.12) ×10 cm/s~(3.28±0.23) -7 ×10 cm/s 范围内，表明所建Caco-2 细胞模型完整性、分化特征和渗透性符合要 求，可用以药物跨膜转运实验。 4. 通过MTT 毒性试验、LDH 释放实验和跨膜电阻检测实验筛选给药浓度， 结果显示，PNS 在200 μg/mL 浓度下对Caco-2 细胞活力无明显影响；LMW-CTS 和LMW-CTS-NPs 在 25 μg/mL 浓度下对 Caco-2 细胞活力和膜完整性无明显影 响，但可大幅降低跨膜电阻至20 % 以下。在所选浓度下进行PNS 跨膜转运实验， -7 结果表明，PNS 原料药的表观渗透系数均在1~10×10 cm/s 范围，提示渗透性差； I LMW-CTS 对Re、Rb 及Rd 的P 无明显影响，对组分R 和Rg 的P 提升分 1 app 1 1 app 别为17.83 %和20.29 % ；与原料药对照相比，LMW-CTS-NPs 使R 、Rg 、Re 、 1 1 Rb 和Rd 的P 分别增加了35.66 %、23.28 % 、29.41 % 、37.99 %和36.00 %， 1 app 表明LMW-CTS 制备成纳米粒后可对PNS 肠道渗透性有一定的促进效果。 关键词：三七总皂苷；低分子量壳聚糖；壳聚糖纳米粒；Caco-2 细胞模型；肠道 渗透性 II