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实验 20 质粒 DNA 的提取与鉴定 授课题目：质粒 DNA 的提取与鉴定（6 学时） 授课对象：生科专业 授课教师： 教学目标及基本要求： 1、学习和掌握快速提取质粒DNA 的原理和方法。 2、学习和掌握质粒DNA 的鉴定。 3、采用开放性实验教学。 教学内容提要及时间分配： 1、实验原理讲解： 8分钟 ➢碱变性法提取质粒DNA 是基于染色体DNA 与质粒DNA 的变性和复性的差异而达到分离的目 的。在pH 值高达 12.6 的碱性环境中，染色体DNA 的氢键断裂，双螺旋结构解开；质粒DNA 的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条链不会完全分离。当用pH 值 4.8 的KAc 或 NaAc 高盐缓冲液调节其 pH 值到中性时，变性的质粒 DNA 又恢复到原来的构型，保存在溶 液中；而线状染色体 DNA 则不能复性，形成缠绕的网状物,通过离心，染色体 DNA 与不稳定 的大分子RNA、蛋白质-SDS 复合物一起沉淀下来而被除去，用乙醇或异丙醇将溶于上清液中 的质粒DNA 沉淀，再用 RNase 除去 RNA，即可获得较纯净的质粒DNA。 2、实验试剂与器材