免疫学检验 放射免疫技术 20 第十九章 放射免疫技术.ppt

放射免疫分析 四、评价与应用 RIA由于具有敏感度高、特异性强、精密度高、重复性好、用血量少、可测定小分子量和大分子量物质等优点，在医学检验中应用极为广泛，常用于各种激素和药物等的测定。 但由于放射性核素的放射性对人体会产生一定的危害性，且其废物的储存和销毁会对环境造成污染，因此操作时必须加以注意。 免疫放射分析 03 免疫放射分析 免疫放射分析（IRMA）是从放射免疫分析（RIA）的基础上发展起来的核素标记免疫测定，其特点为用核素标记的抗体直接与待检抗原反应，并用固相免疫吸附剂作为B或F的分离手段。 免疫放射分析 一、检测原理 IRMA属于非竞争性免疫结合反应，其基本检测原理是将放射性核素（125I）标记在抗体上，并用过量的标记抗体与待测抗原进行非竞争性结合反应，并采用固相免疫吸附方式对B和F进行分离。 检测免疫复合物的放射性，从而得到待检样本的浓度。 免疫放射分析 二、方法与类型 （一） 单位点 IRMA 标记抗体 抗原 固相抗原 免疫放射分析 二、方法与类型 （二） 双位点 IRMA 抗体 抗原 标记抗体 免疫放射分析 三、关键技术 A B C D 抗原抗体反应 分离技术 放射性测定 数据处理 免疫放射分析 （一） 抗原抗体反应 Ag Ab (待检Ag) 牢固的抗原抗体复合物 * 固相抗原抗体复合物 Ab* 免疫放射分析 （二） 分离技术 固相吸附分离技术 一般采用物理吸附法：用碳酸盐缓冲液将预包被抗体稀释3μg/ml~10μg/ml，室温过夜，弃包被缓冲液（含有未结合物质和过剩标记物），并洗涤去掉结合不牢固抗体，从而达到分离的目的；然后，再加入1%牛血清白蛋白溶液，封闭、保存备用。 免疫放射分析 （三） 数据处理 晶体闪烁计数器包括了NaI闪烁晶体、光电倍增管以及计数器。 测量的放射性信号是仪器输出的电脉冲数：每分钟计数(cpm)。 参数 cpm B/T (%) F/T (%) B/F (%) B/B0 (%) 注：T即是B与F的总和 免疫放射分析 四、评价与应用 IRMA的优点 效率高、操作简便 灵敏度高 特异型强 稳定性好 IRMA的缺点 抗体用量较多 抗体的纯化较难 免疫放射分析 四、评价与应用 RMA的测定对象主要限于有两个以上抗原决定簇的肽类或蛋白质。抗体适用于大分子蛋白质和多肽类激素的检测分析，如肿瘤标志物CA15-3，人血清催乳素、胃蛋白酶，血清TSH、凝血因子、降钙素、HBsAg等，某些难以标记的病毒抗原也可通过IRMA进行检测。 小结 Sum up 放射免疫技术是应用放射性核素标记抗原或抗体，通过免疫反应进行定量测定的一种技术。有两种类型经典的放射免疫分析（RIA）和免疫放射分析（IRMA）。 放射免疫分析是待测抗原和定量的标记抗原竞争性结合限量的抗体；免疫放射分析是将放射性物质标记在抗体上，属于非竞争性免疫结合反应。 放射性免疫技术灵敏度高、特异性强，常用于微量物质的定量测定。但由于放射性核素的放射性对人体和环境会产生一定的危害和污染，因此操作时必须加以注意。 感谢观看！ Thank！ 第十九章 放射免疫技术 本章要点 放射免疫技术的基本概念及类型。 1 放射标记物的鉴定与纯化。 2 RIA和IRMA的测定原理及关键技术。 3 RIA和IRMA的临床应用与评价。 4 CONTENTS 目 录 01 02 03 放射性核素和放射性标记物的制备 放射免疫分析性 免疫放射分析 前言 放射免疫技术是将放射性核素高敏感的示踪特点和抗原抗体反应的高特异性特点相结合的一种体外测定超微量物质的新技术。 其基本模式是应用放射性核素标记抗原或抗体，通过免疫反应进行定量测定。 具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，在医学检验中得到了广泛应用。 放射免疫技术根据其方法学原理的不同主要有两种类型：RIA和IRMA。 放射性核素和放射性标记物的制备 01 放射性核素和放射性标记物的制备 放射性核素作为放射性免疫技术的标记物，选择何种放射性核素以及如何制备放射标记物（将放射性核素与抗原或抗体连接），是建立放射免疫技术的基础。 放射性核素和放射性标记物的制备 一、放射性核素的基本知识 最常用的放射性核素是125I。 基本概念：指在自然条件下可发生自发性的转化，由一种放射性核素转变,另一种放射性核素，并同时释放射线（α、β、γ），又称为放射性衰变。 基本类型： 依据其衰变方式：α衰变、β衰变、γ衰变 放射性核素和放射性标记物的制备 125I的优点 化学性质比较活泼，标记方法简单，且容易获得高比活性的标记物； 在衰变过程中产生γ射线，便于测量且效率高； 半衰期适中（60天左右），且废弃物较容易处理。 125I的缺点 用125I取代H，可能使