细菌鉴之生化反应.pptVIP

细菌鉴定之生化反应 南医大三附院检验科江培涛  常用试验 ■碳水化合物的代谢试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验 各种酶类试验 ■扣菌试验  碳水化合物的代谢试验 ■1糖(醇、苷)类发酵试验 原理:细菌含有发酵糖(醇、苷)的酶分解糖类产酸、产气、或仅产酸 培养基:含有0.5%~1%的糖(醇、苷)的液体、半固体、固体、或 微量生化管 方法:纯菌种接种培养基,要求的温度,数小时至两周,微量管注意 保持湿润,以免干燥 结果:能分解糖(醇、苷)类产酸时,培养基中的指示剂呈酸性反应 若能产气时,培养基可出现开裂气泡等现象 意义:肠杆菌科尤为重要  2氧化-发酵试验(O/F) 原理:细菌分解葡萄糖的过程中,必须有分子氧参加的,称为氧化 型;可以进行无氧降解的,称为发酵型;不分解葡萄糖的称为产碱 型 培养基:HL二氏培养基 方法;待测菌同时接种两只HL培养基,其中一只滴加无菌的液体石 蜡,高度不少于1cm,35℃培养48h或更长 ■结果:两只均无变化为产碱型;两只均产酸为发酵型;仅不加石蜡 的产酸为氧化型 ■意义:肠杆菌科与非发酵菌的鉴别;葡萄球菌与微球菌的鉴别,前 者为发酵型,后者为氧化型  3ONPG(β半乳糖苷酶试验) 原理:有的细菌可以产生β半乳糖苷酶,分解邻-硝基酚-β半乳糖苷 生成黄色的邻-硝基酚 ■方法:从KIA上取菌,于0.25ML无菌生理盐水中制菌悬液,加甲苯 滴,使酶释放。37℃水浴5min,加0.25 mIONPG试剂,水浴 20min-3h观察结果 结果:呈现黄色为阳性,一般20-30min内显色 ■意义:迅速及迟缓发酵乳糖的细菌为阳性,不发酵乳糖的细菌为阴 性。本试验主要用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴定 ■注意:该试验不一定与分解乳糖相一致,决定于细菌产生的酶及其 活性  4七叶苷水解试验 原理:有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素,后者与培养基 中的枸橼酸铁的二价铁离子反应生成黑色化合物,使培养基呈黑色 方法:将待测菌接种于七叶苷培养基,培养后观察结果 结果:培养基变黑为阳性,不变为阴性 ■意义:D群链球菌与其他链球菌的区别,前者为阳性;肺炎克雷伯、 阴沟肠杆菌多阳性  5∨-P试验 原理:细菌分解葡萄糖产生丙酮酸,后者脱羧产生乙酰甲基甲醇 乙酰甲基甲醇在碱性环境中被氧化为二乙酰,进而与培养基中蛋白 胨内精氨酸中的胍基作用,生成红色化合物,即为∨-P试验阳性。a 奈酚可加速此反应 培养基:葡萄糖蛋白胨水 方法:待测菌接种于培养基,35℃48h,加入甲液(6%α奈酚酒 精溶液)和乙液(40%KOH溶液) ■结果:20min内出现红色为阳性,如无红色,且于35℃4h后仍如 故即为阴性 意义:本试验常与甲基红一起试验,前者阳性则后者多阴性  6甲基红试验 ■原理ξ细菌分解葡萄糖产生丙酮酸,后者进一步生成甲酸、乙酸 乳酸等,使培养基的PH降至4.5以下,加入甲基红试剂后显红色即 阳性。若产酸量少,或进一步转化为其他物质,则培养基的PH仍在 62以上,加入甲基红试剂后显黄色,为阴性 培养基:葡萄糖蛋白胨水 方法:待测菌接种于培养基,2-4天后,加入甲基红试剂,观察结果 结果:呈现红色为阳性,橘红色为弱阳性,黄色为阴性 意义:大肠、沙门、志贺、变形、枸橼酸杄菌、等为阳性;肠杆菌 属、哈夫尼亚菌属为阴性  7葡萄糖酸盐试验 原理:某些细菌能氧化葡萄糖酸盐作为唯一碳源,生成2-酮基葡萄 糖酸盐。加入班氏试剂,于沸水煮沸10分钟,出现砖红色沉淀,表 明有葡萄糖酸盐的存在 培养基:2-酮基葡萄糖酸盐肉汤 方法:待测菌接种于培养基,35℃培养18-24h,于其中加入 0.3m浓缩班氏试剂,然后沸水中煮沸10分钟,出现砖红色沉淀表 明有葡萄糖酸盐的存在 意义:用于肠杆菌科分类  蛋白质和氨基酸的代谢试验 1明胶液化试验 原理:细菌产生明胶酶,能使明胶分解为氨基酸,从而失去凝固力,半固 体变为液体 方法:待测菌接种于明胶培养基,22℃培养7天。若用35℃孵育,因明 胶在此温度下自行液化,故在观察前先置4℃冰箱30min再观察 结果:培养基呈液化状态为阳性 意义:多数假单胞菌能液化明胶,肠杆菌科细菌如:沙雷菌、变形杆菌、 阴沟杆菌等可液化明胶