普通微生物外源基因在细菌中表达精选.pptVIP

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2020-08-27 发布于福建
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普通微生物外源基因在细菌中表达精选.ppt

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第六节:外源基因在细菌中的表达张莹实验楼A413 大肠杆菌毕赤酵母番茄叶子 Hela细胞大肠杆菌中表达外源基因 1.同源克隆获得对虾整合素的cDNA全长序列 c:9:sEat动以话二t L RWG 1「 AVATLA 4 T D TGTGGGAAACCaGGGAATTTCACaAATGAGATGGCAAAGGACTATEAAG1TGCaJCaA 055c15112 361 4557004-GTUCA0JUGCAGIUGTAICAGCITAGIGT-GITCCGA-G4-GIGI 4LArTCAAAGAGTACAGATGAGGCTGAGAGTCCAGGAAGcA7 GC-AU-c-aTeGGrGiCaLGATAcICICCAA CCATIAGCCGA 601 4G40A10C--AJLACAAUbAITILA-ACILUULLRO 2 P--PITTCPTTTLATAATTAITAA.TAI.aena-是m GfAATGOUTTCCACTCACCACAAATGCCACTGCCTTIGCTTA 841《ATT UGCCATTGTTTGTCAGGAr CAGATTAGGTGGG. 0S 61 ACLCAAIGATGGNGAGTGECACCICAATAACAAGGCGaft a H 021 CCEICAGGATTATOCICAGTCTCACAGATTAATCAAGTCGDCAAACAGCACAaG 大肠杆菌中表达外源基因 2.整合素多序列比对和空间结构分析翻建】: 锂輯鲁HH 金属离子结合位点 Hybnd domain 臘翻}蟹經 H删H}甲大肠杆菌中表达外源基因 3.整合素的βA结构域的重组与蛋白纯化 654M12M3 哥翻間 M:蛋白 marker 1:pET32 integrin重组蛋白诱导前 2:pET32- Integrin重组蛋白诱导后 3:纯化的pET32 integrin重组蛋白 4:pET32诱导前 5:pET32诱导后 6;纯化的Trx蛋白大肠杆菌中表达外源基因 4.整合素在大肠杆菌中大量培养及纯化大肠杆菌中表达外源基因 5.整合素重组蛋白的活性鉴定表达载体 ●表达载体:具有宿主细胞基因表达所需调控序列,能使克隆的基因在宿主细胞内转录和翻译的载体。 pUC ORI pMI en2.1 3.0k 平克隆载体与表达载体的区别克隆载体:高拷贝、导入原核细菌、大量复制。表达载体:高拷贝或低拷贝、导入工程菌或细胞(导入的基因由克隆载体产生、高蛋白表达效率。 Arp PGEMX-T Easy (3023b0) cs857 克隆载体「l 表达载体 ②是否含有表达系统元件,即启动子-核糖体结合位点克隆位点-转录终止信号,这是用来区别克隆载体和表达载体的标志。外源基因的转录 1、启动子位于转录起点上游,为RNA聚合酶结合并起始转录的一段DNA控制序列。 35区:RNA聚合酶识别并结合的位点 -10区:RNA聚合酶于该处解开DNA双链,并决定转录起点