目的基因的原核诱导表达及SDSPAGE凝胶电泳幻灯片课件.pptVIP

目的蛋白质的检测 蛋白质分子量的检测 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 目的蛋白质的分析 实验原理 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）是目前用于测定蛋白质分子量最好的方法。 SDS是一种强阴离子型去污剂，能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。在样品和凝胶中加入SDS和还原剂后，强还原剂例如β巯基乙醇和二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂，通过加热使蛋白质解离。解离后的氨基酸侧链与SDS结合形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物。 实验原理 蛋白质中加入 SDS 并加热， SDS 分子上的非极性区 (黄色尾巴)会与蛋白质上的非极性区结合，使蛋白质变性，成为一线状长条分子，上面布满 SDS 分子。SDS 分子的极性区 (洋红色圆点)，则露在外面，以增加亲水性。 SDS是一种阴离子表面活性剂，能打断氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白质分子间的天然的电荷差异。SDS最终使蛋白质变成具有高负电荷的线状分子。 97.0 kDa 实验准备 诱导、培养 37℃恒温摇床 电泳检测 Hoefer miniVE Vertical Electrophoresis System 仪器与设备 LB培养基、Amp、IPTG 30%丙烯酰胺贮