临床微生物检验技术 分枝杆菌属 结核杆菌.ppt

1、涂片显微镜检查 （1）直接涂片镜检 ①薄涂片：0.01ml痰涂抹载玻片，抗酸染色 ②厚涂片：0.1ml痰涂抹载玻片，抗酸染色 （2）集菌涂片 先集菌后检查，可提高检出率，脑脊液和胸、腹水可直接离心沉淀集菌；痰、支气管灌洗液、尿、粪等污染标本需处理 沉淀集菌：20g/L NaOH 37℃ 30min，3000r/min离心30min，沉渣涂片，抗酸染色 漂浮集菌：标本加NS稀释，加0.5-1ml汽油,震荡15-30min,取泡沫、油层交界处涂片，抗酸染色 （3）荧光染色 荧光显微镜检查 抗酸菌有黄绿色或橙色荧光 2、分离培养 标本前处理 （1）4%NaOH： 痰∶ 4%NaOH=1 ∶ 2， 震荡，35℃ 15-30min， 3000r/min离心15min，沉渣 （2）4%H2SO4：尿, 20min （3）胰酶-新洁尔灭：1g/L胰酶、0.3%新洁尔灭5min 培养基 0.1ml标本接种L-J培养基 结核分枝杆菌生长缓慢，2～4周出现肉眼可见菌落，速生菌7天内出现菌落 第1周观察1次/日,后1次/周,至第8周 3、鉴定 （1）抗酸染色 （2）培养：生长速度、色素 （3）快速培养 （4）生化试验：热触酶、硝酸盐还原 （5）免疫学检测 （6）分子生物学检测 * 第13章 分枝杆菌属 细长略弯，有时分枝状生长的杆菌 胞壁含大量脂质，不易着色，加温或延长染色时间着色后，能抵抗强脱色剂盐酸乙醇的脱色，故又称抗酸杆菌 分枝杆菌分类 分类 生长特性 主要对人致病的 分枝杆菌 结核分枝杆菌复合群 生长缓慢 人型结核分枝杆菌 牛型结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌 Ⅰ组 生长缓慢、光产色 堪萨斯分枝杆菌 Ⅱ组 生长缓慢、暗产色 瘰疠分枝杆菌 Ⅲ组 生长缓慢、不产色 鸟-胞内分枝杆菌 Ⅳ组 生长快速 偶发分枝杆菌 麻风分枝杆菌 人工培养基不生长 麻风 （一）生物学性状形态与染色 细长，直或略弯杆状，有时分枝，有荚膜，革兰阳性，抗酸菌 一、结核分枝杆菌 抗酸染色法 5％石炭酸复红加温染色，3％盐酸乙醇脱色，美蓝复染 分枝杆菌呈红色，其他细菌和背景为蓝色 培养 专性需氧 PH6.5-6.8 生长缓慢,营养要求高 罗氏培养基（L-J）:2-4周,乳白色、米黄色，颗粒、结节、菜花状R型菌落 生化反应 触酶阳性 耐热触酶（68℃20min）阴性，区别于非结核分枝杆菌 抵抗力 耐受： 干燥 强酸或强碱 孔雀绿 敏感： 75%乙醇 湿热 紫外线 变异性 形态结构变异： 结核杆菌的L型：颗粒状、丝状、Much（莫赫）颗粒（抗酸阴性革兰阳性） 毒力变异： 卡介苗BCG：有毒的牛型结核分枝杆菌在罗氏培养基中，经13年230代而获得的减毒活疫苗株，可预防结核病 耐药性变异：利福平、异烟肼、乙胺丁醇联合用药 致 病 物 质 （二）临床意义 荚膜 与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用） 含多种酶（分解利用营养物质） 保护（阻止有害物质进入菌体） 脂质 索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿） 磷脂（形成结核结节） 硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合） 蜡质D（引起迟发性过敏反应） 蛋白质 引起迟发性过敏反应 细胞壁含大量脂质 分枝菌酸（与抗酸性有关） 所致疾病 感染方式 呼吸道、消化道或皮肤粘膜 慢性，伴肉芽肿 1、肺部感染：肺结核 2、肺外感染：脑、肾、肠、腹腔等，多与结核分枝杆菌L型有关 肺结核 （1）原发感染 外源性感染，多发生于儿童（无免疫力） 原发综合征 (原发灶、淋巴管炎、 肺门淋巴结炎) 大多纤维化、钙化，形成结核结节，少数抵抗力低者血流播散，引起粟粒性肺结核、结核性脑膜炎 （2）原发后感染（继发感染） 内或外源性感染，多见成人（有免疫力） 病灶局限，局部反应剧烈，干酪性坏死、空洞，开放性TB 免疫性与超敏反应 属于感染免疫（有菌免疫），细胞免疫为主 免疫与迟发型超敏反应同时存在 结核菌素试验 用结核菌素进行皮肤试验，测定机体对结核分枝杆菌是否能引起迟发型超敏反应（Ⅳ型变态反应），判断机体对结核菌有无免疫力 方法 OT 前臂皮内注射纯蛋白衍生物PPD 5单位 意义 48～72h红肿硬结在5-15mm为阳性，曾有感染，有免疫力，不表示患病 ≥15mm为强阳性，可能是活动性结核，需进一步检查 ＜5mm为阴性，未感染或未接种疫苗 但应除外以下情况 免疫功能低下或使用免疫抑制剂 原发感染早期 正患其它传染病，如麻疹 严重结核病、危重患者 应用 选择BCG接种对象和测定接种后的免疫效果，结素试验阴性者应接种或补种卡介苗 在未接种卡介苗的人群中作结核杆菌感染的流行病学调查,了解人群自然感染率 作为婴幼儿(尚未接种过卡介苗者)结核病的辅助诊断 测定肿瘤患者的细胞免疫功能 （三）微生物学检验 标本选择根据感