第五章重组dna技术.pptxVIP

第五章 重组DNA技术;第 一 节 重组DNA技术的主要工具;分类 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ （基因工程技术中常用Ⅱ型）;Bam HⅠ;重组DNA技术中常用的工具酶;第 二 节 载体;克隆载体(cloning vector) 为使插入的外源DNA序列被扩增而特意设计的载体称为克隆载体。 表达载体(expression vector) 含有能被宿主细胞基因表达系统识别的表达元件、从而可以在宿主细胞内表达目的基因合成目的蛋白的载体。;载体的选择标准;质粒 (plasmid);第 二 节 重组DNA技术的基本原理; 以 质 粒 为 载 体 的 DNA 克 隆 过 程;一 目的基因的获取;三 目的基因与载体的连接;目的基因;2. 粘性末端连接 方式：(1)同一限制酶切位点连接 (2)不同限制酶切位点连接 单酶切末端连接 双酶切末端连接;Bam HⅠ切割反应;不同限制酶切位点（非配伍末端）的连接;3. 同聚物加尾连接 在末端转移酶(terminal transferase)的作用下，在DNA片段末端加上同聚物序列、制造出粘性末端，再进行粘端连接。;5′ 3′;4. 人工接头(linker)连接 由平端加上新的酶切位点，再用限制酶切除产生粘性末端，而