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第七章 螺旋体 (Spirocha) 夏 春 教授 中国农业大学动物医学院 预防兽医学教研室 本章重点 ? 以猪痢疾密螺旋体、钩端螺旋体为 主要内容，病原体的观察方法、培 养特性及诊断方法。 概 述 ? 螺旋体是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状、 能活泼运动的原核单细胞微生物。 ? 基本结构与细菌类似， 有细胞壁、核质、 以二分裂繁殖和对抗生素敏感。 ? 根据螺旋数目、大小与规则程度，以及两 螺旋间距离， 分为 5 个属。 ? 其中不少是非致病性的。 螺旋体细胞呈螺旋状圆柱形，具有多个完整的 螺旋。长可为 5-250um ，宽可为 0.1-3um 。 ? 某些可通过细菌滤器。 ? 细胞的螺数、螺间及弧幅各不相同，在分类上有意 义。 ? 轴丝 螺旋体的细胞中心为原生质柱，外有 2-100 根以上的 轴丝，又称轴鞭毛或内鞭毛，现亦简称为 鞭毛，沿原生质柱的长轴缠绕其上。 ? 轴丝夹在细胞壁外鞘和细胞膜之间。 形态与结构 ? 对人和动物有致病性的有三个属： ? 疏螺旋体属 (Borrelia) ? 3-10 个稀疏而不规则的螺旋，呈波状。 ? 密螺旋体属 (Treponema) ? 有细密而规则的螺旋，数目较多，两端尖。 ? 钩端螺旋体属 (Leptospira) ? 螺旋较密螺旋体更细密而规则，一端或两端 弯曲成钩状，故名。其中许多群和型能引起人 和动物钩端螺旋体病。 “ 梅毒” 第一节 蛇形螺旋体属（ Serpulina ） ? 蛇形螺旋体属是一个 新属 ，包括 猪痢蛇形螺旋 体 和无害蛇形螺旋体。 ? 细胞呈疏松、规则的螺旋形， 呈屈曲和蛇形运 动或移位运动。 ? 有机营养 , 厌氧生长。 ? 可呈现微弱或强 β 溶血。 猪痢蛇形螺旋体 一、生物学特性 ? 1. 形态结构及染色特性 本螺旋体形态结构与其属的描述一致， 菌体多为 2-4 个弯曲， 两端尖锐。 革兰氏阴性，姬姆萨氏和镀银法均能使其 较好着色。 2. 培养特性 ? 严格厌氧， 一般厌氧环境不易培养成功，必 须使用预先还原的培养基，并置于含的 H2( 或 N2) 和 CO2( 二者比例为 80 ： 20) 混合气体 以及 以冷钯为触媒的环境中才能生长。 ? 对培养基要求苛刻， 通常使用含 10 ％胎牛 ( 或 犊牛或兔 ) 血清或血液的 TSB 或 BHIB 培养基。 ? 在 TSB 血液琼脂上， 38 ℃ 48-96min 可形成扁 平、半透明、针尖状、 强 β 溶血性菌落。 3. 抗原与免疫性 ? 猪痢疾密螺旋体有两种抗原成分： ? 脂多糖、蛋白质 （特异性）。 ? 该菌有 8 个血清型。 ? 自然发病猪康复后，可产生相应的抗体，具有 一定的保护力。 4. 致病性 ? 常发生于 8-14 周龄幼猪， 引起猪痢疾 ? （血痢、黑痢、出血性痢疾、粘膜出血性痢） ? 主要症状是严重粘膜出血性下痢和迅速减重。 ? 特征病变为 大肠粘膜发生部液渗出性 ( 卡他性 ) 、 出血性和坏死性炎症 。 ? 经口传染， 病原传播迅速，发病率较高 ( 约 75 ％ ) 而致死率较低 (5 ％ -20 ％ ) 。 5. 微生物学检查 ? 直接镜检 ( 3 种方法 ) ? 染色镜检： ? 以病猪的新鲜粪便粘液，或病变结肠粘膜刮取物制成 薄涂片，染色镜检。 多用姬姆萨氏法染色法。 也可用 印度墨汁作负染或镀银染色法染色镜检。 ? 相差或暗视野显微镜活体检查： ? 待检样品与适量生理盐水混合后制成压滴标本片，用 相差或暗视野显微镜下镜检。若 每个高倍视野中见有 2-3 个或更多个蛇样运动的较大螺旋体即可确诊。 ? 染色组织切片检查 ： ? 将采集的病变肠组织先用 10 ％甲醛缓冲液固定后切片， 再用维多利亚蓝染色法染色。镜检时可见螺旋体大量存 在组织表面及粘液囊腔内，有时数量多到堆积成网状。 ? 分离培养： ? 过滤培养法： ? 将样品作 5-10 倍稀释，轻度离心，上清用 0.8um 和 0.45um 滤膜依次 过滤 。 取滤液直接涂布接种于鲜血琼 脂平板上，厌氧培养 37- 38℃培养 3-6d ，每隔 2d 检查 1 次，当观察到平板上出现β溶血现象时，即可挑取可疑 菌落，作成悬滴或压滴标本，用暗视野显微镜检查。 钩端螺旋体（暗视野映光法） 6. 防 治 ? 对猪痢目前尚无可靠或实用的免疫制剂以 供预防之用。 ? 普遍采用抗生素和化学药物控制此病 . ? 培育 SPF 猪，净化猪群是防治本病的主要手 段。 第二节 细螺旋体属 ( Leptospira ) ? 细螺旋体属成员是一大类纤细、螺旋致 密，一端或两端弯曲呈钩状的螺旋体， 故常称钩端螺旋体，简称钩体。 ? 大部分营腐生生活，广泛分布于各种水 生环境中，无致病性。一部分为寄生性 和致病性的螺旋体，可引起人和动物的 细螺