3 唾液淀粉酶活性的观察课堂.pptVIP

1 实验三 唾液淀粉酶活性的观察 动物医学院动物生化教研室 动物生物化学实验 2 ① 掌握酶的催化活性，酶的高效性和特异性 ② 了解各种因素（如温度、 pH 及一些化学物质）对酶活性 的影响 ③ 唾液淀粉酶的制备和活性观察 一、实验目的 3 二、实验原理 ? 酶是生物体内具有催化功能的生物大分子，也叫 生物催化剂。 ? 酶活性 : 酶的催化能力 , 用催化化学反应的速度表示 ? 酶活性的测定方法： 1 ）定底物 2 ）定时间 ? 影响酶活性的因素是多方面的，如 温度、 pH, 激活剂和抑制剂 等都会影响 酶的催化活性。 4 二、实验原理 ? pH 值的影响 : 能使酶活性达到最高时的 pH 值，称为该酶的最适 pH 。 ? 温度的影响 : 在一定温度范围内，随着温度的升高，酶促反应速 度增加，直至达到最大值。在一定条件下，能使酶活性达到最高 的温度即酶的最适温度 。 ? 激活剂和抑制剂的影响 : 能增高酶活性的物质即称为酶的激活剂， 能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的抑制剂。 5 ? 本实验以 淀粉 为底物 , 淀粉酶作用下得到各种糊精乃至麦芽糖、 少量葡萄糖等水解产物。用碘液检查酶促淀粉的水解程度，来说 明温度、 pH 及化学物质对酶活力的影响。 淀粉酶 淀粉酶 淀粉 —————— → 糊精 —————→ 麦芽糖 + 少量葡萄糖 加碘后；（ 兰色 ） （ 紫红色、暗褐色或红色 等） （棕黄色，碘本身颜色） 二、实验原理 ? 影响酶活性的因素 1 ）温度 2 ） pH 3 ）激活剂和抑制剂 ? 酶的特性（专一性） 还原糖和斑氏（ Benedict ）试剂的反应原理 C 6 H 12 O 6 + 2Cu(OH) 2 C 5 H 11 O 5 .COOH + Cu 2 O + 2H 2 O OH - 加热 实验原理 1 O H OH H H OH H OH CH 2 OH H CH 2 OH H H 2 HO O HOCH 2 H O 1 O H OH H H OH H OH CH 2 OH H O 4 O H H OH H OH H OH CH 2 OH H α -D- 葡萄糖 β -D- 果糖 蔗糖分子结构（葡萄糖 α , β - 1,2 - 果糖苷） 麦芽糖分子结构（葡萄糖 α - 1,4 - 葡萄糖苷） OH 7 三、试剂及器材 1. 试剂 ? （ 1 ） 0.5% (w/v) 淀粉溶液 ? （ 2 ）稀碘溶液 ? （ 3 ）不同 pH 缓冲液 (pH5.0 、 6.8 、 8.0) ? （ 4 ） 1% (w/v) NaCl 溶液 ? （ 5 ） 1% (w/v) CuSO 4 溶液 2. 器材 ? 比色板、水浴锅、刻度吸管及滴管 8 四、操作步骤 ? 1. 温度对酶活力的影响 取 3 支试管，编号后按下表操作 : 试管编号 1 2 3 0.5% 淀粉 5 5 5 pH 6.8 缓冲液 0.5 0.5 0.5 反应条件 置冰水浴中 置 37 ℃ 水浴中 置沸水浴中 稀释唾液 1 1 1 单位： mL 9 ? 在干净的比色板上，于各孔穴中分别滴加 2 滴碘液。 ? 每隔 1min 从第 2 支试管中取反应液 1 滴，与比色板孔穴中 的碘液混合，观察颜色的变化。 ? 待第 2 支试管中的反应液与比色板孔穴中的碘液混合后颜 色呈棕色时，取出试管，并将在沸水浴中处理的试管用 冷水冷却，然后向各试管中滴加碘液 1-3 滴。 ? 摇匀后观察并记录各管颜色，比较各管中淀粉水解的程 度，说明温度对酶活性的影响。 10 ? 2. pH 值对酶活力的影响 取 3 支试管，按下表编号后进行实验。 四、操作步骤 单位： mL 试剂 1 2 3 0.5% 淀粉 2 2 2 pH 5.0 缓冲液 2 — — pH 6.8 缓冲液 — 2 — pH 8.0 缓冲液 — — 2 稀释唾液 1 1 1 11 ? 摇匀后，将各管置于 37 ℃ 水浴中处理。 ? （ 1 ）每隔 1min 从 pH6.8 的试管中取出 1 滴反应液滴于预 先滴加稀碘液的白瓷板上，观察其颜色变化。 ? （ 2 ）待颜色呈棕色时，向各管中加稀碘液 1-3 滴。观 察各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度， 解释 pH 对 酶活性的影响 。 12 ? 3. 酶反应的特异性 取 2 支试管，按下表编号后进行实验。 四、操作步骤 单位： mL 试剂 1 2 0.5% 淀粉 2 — 0.5% 蔗糖 — 2 稀释唾液 1 1