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紫外分光光度计的使用原理和方法 紫外-可见吸收光谱 朗伯-比耳定律 紫外-可见分光光度计 分析条件的选择 测定方法 在医学检验中的应用  紫外-可见分光光度法 ultraviolet-visible spectrophotometry, UV-VIS) 它是利用物质的分子或离子对某一波 长范围的光的吸收作用,对物质进行定性 分析、定量分析及结构分析,所依据的光 谱是分子或离子吸收入射光中特定波长的 光而产生的吸收光谱。 按所吸收光的波长区域不同,分为紫外 分光光度法和可见分光光度法,合称为紫外 可见分光光度法  紫外-可见分光光度法的特点 1与其它光谱分析方法相比,其仪器设备和 操作都比较简单,费用少,分析速度快 2灵敏度高; 3选择性好; 4精密度和准确度较高 5用途广泛。  §1.紫外-可见吸收光谱 1.物质对光的选择性吸收 物质对光的吸收是选择性的,利用 被测物质对某波长的光的吸收来了解物 质的特性,这就是光谱法的基础  通过测定被测物质对不同波长的光的吸 收强度(吸光度),以波长为横坐标,吸光 度为纵坐标作图,得出该物质在测定波长范 围的吸收曲线。如图3-1; 在吸收曲线中,通常选用最大吸收波长 λma进行物质含量的测定。  2有机化合物的紫外-可见吸收光谱 1有机化合物的电子跃迁 与紫外-可见吸收光谱有关的电子有三 种,即形成单键的σ电子、形成双键的丌电 子以及未参与成键的n电子 跃迁类型有:σσ、nG、TT n-*四种。  饱合有机化合物的电子跃迁类型为a→*, n→σ*跃迁,吸收峰一般出现在真空紫外区, 吸收峰低于200nm,实际应用价值不大 不饱合机化合物的电子跃迁类型为 π→π*跃迁,吸收峰一般大于200nm  生色团:是指分子中可以吸收光子而产生电 子跃迁的原子基团。人们通常将能吸收紫外 可见光的原子团或结构系统定义为生色团 见表3-1和3-2。 助色团:是指带有非键电子对的基团,如 OH、OR、NHR、SH、Cl、-Br、-I等, 它们本身不能吸收大于200nm的光,但是当 它们与生色团相连时,会使生色团的吸收峰 向长波方向移动,并且增加其吸收强度。见 表3-4。  红移和紫移 在有机化合物中,常常因取代基的变更 或溶剂的改变,使其吸收带的最大吸收波长 入m发生移动。向长波方向移动称为红移(表3 3),向短波方向移动称为紫移。  22有机化合物的吸收带 吸收带 absorption band在紫外光谱中,吸 收峰在光谱中的波带位置。根据电子及分 子轨道的种类,可将吸收带分为四种类型 R吸收带 (2)K吸收带 (3)B吸收带 (4)E吸收带