DNA重组技术的基本工具课件课堂.pptVIP

1 2 问题探讨： 苏云金芽孢杆菌含有一 种可以合成毒蛋白的基因。 让细菌的毒蛋白基因在 棉花细胞中表达，可培育出 抵抗棉铃虫害的抗虫棉。 苏云金芽孢杆菌 毒蛋白 普通棉花 抗虫棉 3 DNA 外源基因 G C A T T G C A A C G T C G T A G C A T T G C A 4 限制酶的识别特点 ? 以中轴线两侧的双链 DNA 上碱基呈反向对称，重复排 列 ? ? 如： GAA TTC CCC GGG ? CTT AAG GGG CCC 5 G A A T T C C T T A A G C T T A A G A A T T C G 粘性末端 特定的 核苷酸 序列 (6) 特定的切 点 EcoRI 限制酶 中轴线 6 不 同 的 限 制 酶 所 形 成 的 黏 性 末 端 不 同 C C C G G G C C C G G G 特定的核苷 酸序列 (6) 特定的切 点 C C C G G G G G G C C C 平末端 平末端 Smal 酶 7 黏性末端和平末端 8 DNA 分子 切割 DNA 分子实质是 断开两个核苷酸之间的 磷酸二酯键 。 9 ? 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制 酶切几个切口？可产生几个黏性 ( 平 ) 末端？ ? 如果把两种来源不同的 DNA 用同一种限制酶 来切割，会怎样呢？ 思考 ? 10 DNA 外源基因 G C A T T G C A A C G T C G T A G C A T T G C A 11 ? 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制 酶切几个切口？可产生几个黏性 ( 平 ) 末端？ 要切两个切口，产生四个黏性 ( 平 ) 末端。 ? 如果把两种来源不同的 DNA 用同一种限制酶 来切割，会怎样呢？ 会产生 相同的黏性 ( 平 ) 末端 ，然后让两 者的黏性 ( 平 ) 末端 黏合 起来，就似乎可以合 成重组的 DNA 分子了。 思考 ? 12 13 可把黏性末端之间的 缝隙“缝合” 起来， E· coli DNA 连接酶 或 T 4 DNA 连接酶 即 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 14 可把黏性末端之间的 缝隙“缝合” 起来， E· coli DNA 连接酶 或 T 4 DNA 连接酶 即 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 15 ③类型： 类型 E· coli DNA 连接酶 T 4 DNA 连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T 4 噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接 黏性末端 能连接 黏性末端 和 平末端 ( 效率较低 ) 相同点 差别 （二）“分子缝合针” —— DNA 连接 酶 16 DNA 聚合酶 DNA 连接酶 区别 1 区别 2 相同点 寻根问底 ? DNA 连接酶与 DNA 聚合酶是一回事吗 ? 为什么 ? 1) 只能将 单个核苷酸 连 接到已有的核酸片段上， 形成磷酸二酯键 形成 磷酸二酯键 1) 在 两个 DNA 片段之 间 形成磷酸二酯键 2) 以 一条 DNA 链为模板 ， 将 单个核苷酸 通过磷酸 二酯键连接成一条互补 的 DNA 链 2) 将 DNA 双链上的 两 个缺口同时连接 起来， 不需要模板 Go on 17 三、“分子运输车” ——基因进入受体细胞的载 体 ⒈载体需要的条件： ⑴有 1 ~ 多个限制酶切点 ⑵对受体细胞无害 ⑶导入基因能在受体细胞中复制、表达 ⑷有某些标记基因，便于筛选 ⒉常用运载体： ⑴细菌的质粒 ⑵噬菌体或某些动植物病毒 ⑶假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转 录，转基因生物能有预想的效果吗？ ⑴作为分子运输车 —— 载体，如果没有切割位点将 会怎样？ ⑵霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分 子运输车吗？ ⑷目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？ 18 ? 常用的载体：质粒 能复制并带着 插入的目的基 因一起复制 有切割位点 有标记基因的 存在，可用含 氨苄青霉素的 培养基鉴别