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31 ? 先将 DNA 分子溶解到氯化钙溶液中，再缓慢 滴加含磷酸的 HEPES 溶液，形成细小的 DNA- 磷酸钙共沉淀颗粒。小心地将这些颗粒吸出加 入到培养的靶细胞表面，保温数小时后， DNA 会被靶细胞吞噬。更换培养基以使外源 性基因在靶细胞中表达，再筛选转化阳性的细 胞。 32 33 ? 优点：方法简单，而且可以进行共转化，即将 不含选择标记的 DNA 放在一起形成混合的共沉 淀物，一起导入细胞。 ? 缺点：转染效率低，约为 10-3-10-6 。 34 影响 DNA- 磷酸钙共沉淀法 效率的因素 ? 影响磷酸钙转染效率的主要因素有： 1. DNA- 磷酸钙共沉淀物中 DNA 的数量。 2. 共沉淀物与细胞接触的保温时间。 3. 甘油或 DMSO 等促进因子作用的持续时 间等。。 35 36 3.DEAE- 葡聚糖转染技术 ? 二乙氨乙基葡聚糖 (diethyl-aminoethyl-dextran) ，简 称 DEAE- 葡聚糖，是一种高分子量的多聚阳离子试剂， 能促进哺乳动物细胞捕获外源的 DNA ，实现瞬时的有 效表达。 ? 基因的瞬时表达 : 是指在 DNA 进入细胞后迅速发生的反 应，因此可作为一种有用的基因分析系统。 DEAE- 葡 聚糖转染的细胞往往可以获得高水平的表达，利于基 因瞬时表达 (transient expression) 实验。 37 DEAE