单分子免疫检测复习课件.pptVIP

蛋白生物标志物的开发速度仍显缓慢年均仅有1-2个新的生物标志物进入临床应用 * 现有技术的瓶颈极大限制了蛋白生物标志物的发展 .......... 检测水平达到pg/mL或fg/mL级别,甚至单分子 生物分析检测领域，最小极限尺寸-------单分子水平 见“微”知著突破极限 超高灵敏蛋白检测：助力揭示微妙生物学事件。 检测对象：细胞因子等，因浓度极低，pg/mL或fg/mL级别。 * .......... 区分健康，风险与疾病个体 * 突破检测极限，不但能诊断疾病，还能预知风险。 .......... 血清心肌肌钙蛋白cTnI本底高，未来风险也较高 * 血液中的cTnl都可被精确检测，并且99%个体的表达水平都在10.19pg/mL以下，大多数个体的实测值在1-2pg/mL之 间。 cTnI 大多数个体的实测值在1-2pg/mL之间 .......... 助力单抗药物研发Pfizer辉瑞哮喘候选药物IMA638和IMA026哮喘诱发因 素IL-13的动态监测 * 研发药物的代谢动力学和药物效应动力学分析 .......... 治疗性抗体与抗凝全血孵育后细胞因子释放检测 * 监测及预防肿瘤免疫治疗并发症：细胞因子释放综合征 .......... 单抗治疗前后细胞因子水平: 100% 可被检测TNF-α：0.1 pg/mL ，IL-2：0.2 pg/mL * .......... 数字PCR对单分子免疫的启示 * .......... 商品化单分子免疫检测的技术平台Quanterix公司的SiMoA系统和Merck的SMC系统 * 美国Quanterix公司的创始人是David Walt，大学化学系的教授，美国国家科学院和工程院的双料院士，基因测序龙头企业Illumina公司的创始人之一。 2007年，David Walt在美国创立Quanterix Corporation，首次推出SiMoA技术。 2013年推出科研系列产品——基于SiMoA技术的检测设备。 2015年推出第二代基于SiMoA技术的检测设备。 Illumina是由David Walt博士、CW 集团的Larry Bock、兽医学博士John Stuelpnagel、 Anthony Czarnik博士及Mark Chee博士于1998年4月共同组建。 .......... SiMoA系统原理 * 微孔（3μm左右） .......... 蛋白生物标志物的开发速度仍显缓慢 * SiMoA系统原理 .......... Simoa技术参数 * 反应体系：2.7 μm抗体包被磁珠+生物素化的检测抗体+链霉亲和素半乳糖甘酶 1个磁珠包被250000个捕获抗体，靶点分子极少的时候，1个磁珠仅补获1个蛋白分子 检测体系： 加入底物的磁珠转移到 Simoa 光盘上。 每个光盘有24个芯片（Array）， 每个芯片 有238000个直径为4.25 μm 的小孔，1个小孔仅能容纳一个磁珠 小孔体系仅有50 fL，在芯 片表面推一层油，一方面除去多余磁珠，另一方面将信号密封在小孔中。 信号CCD 成像。 50 fL 的反应体系比ELISA 100 μL 的体系小了20亿倍。灵敏度提高1000倍。 已开发120多个相关试剂盒，同时 Simoa 是开放平台。 兼具蛋白检测与核酸分子检测的通用技术平台。 .......... Simoa检测内容 1. Simoa可以在血清/血浆中检测NfL、Tau、pTau、Aβ40、Aβ42等超低丰度神经因子； 2. Simoa可以通过加大稀释倍数，检测房水、玻璃体、眼泪等微量样品中的炎症因子； 3. Simoa可以在单个细胞中定量蛋白，实现单个胚胎细胞培养上清中的蛋白检测； 4. Simoa可以在外泌体等稀少样品类型中检测PD1、PD-L1等蛋白； 5. Simoa可以在阿尔兹海默症初期（提前16年），在接近正常人的患者血清中检测到蛋白标志物NfL * .......... Simoa检测内容 * .......... Simoa检测内容 * .......... Simoa实测灵敏度范围 * .......... SiMoA系统的投融资 * 2016年乐普（北京）医疗器械股份有限公司第一期1100万美元的募资将全额投给Quanterix公司，参与其D轮投资，以增资方式获得5.35%股权。 2017年12月Quanterix在美国纳斯达克上市，目前全球已有200+装机用户。 2018年1月，杭州纽蓝科技有限公司成为美国quanterix公司中国区总代理 .......... 单分子免疫检测SMC系统 * SMC（SingleMolecule Counting）系统最早由Singulex公司开发。Erenna系统是SMC第一代单