PCR扩增目的基因 .ppt

PCR扩增目的基因 任务二：PCR扩增目的基因 一、实验目的 1、掌握PCR扩增DNA的技术与原理 2、学习PCR扩增仪的使用 二、实验原理 聚合酶链式反应是一种体外DNA扩增技术，具有灵敏度高、特异性强、操作简便和应用广泛等特点。 PCR工作原理类似于DNA的体内复制过程，是将待扩增的DNA片段和与其两侧的已知序列合成两个与模板DNA互补的寡核苷酸作为引物，引物序列将决定扩增序列片段的特异性和片段长度。 标准的PCR过程分为三步： 　　1.模板变性（92℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA 　　2.低温退火（37℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。 　　3.延伸（72℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′ 端延伸，合成与模板互补的DNA链。 三、实验仪器 PCR扩增仪 台式高速离心机 移液器 高压灭菌后的Eppendorf管（0.5mL ） 电泳仪 四、材料与试剂 1、模板DNA（0.1μg/μL）：用牙签挑取单 菌落悬浮到50μL的裂解液中（1%TritonX- 100，20mmol/LTris-HCLpH8.2，2mmol/L EDTA），95℃温浴10min，10000r/min 离心5min，取2μL上清液用于总体积50μL的PC