提取组织RNA,反转录,qPCR流程图.docx

一、Total RNA的提取： 1. 取出样本，放入灭过菌的研钵中，倒入液氮，研磨，整个过程要始终保持有液氮，10min左右，研磨充分后加入1.5ml的EP管，加入1ml Trizol，充分匀浆。（另一种，加入trizol会冻起来，就一直研磨，直到最后化成液体。） 2. 室温静置10min，12000g，4度，5min，上清转移到新的1.5ml的EP管中 3. 加入1/4体积的氯仿，振荡混匀，室温静置15min，12000g，4度，15min，上清转移至新管； 4. 加入等体积的异丙醇，轻轻摇匀，室温静置10min，12000g，4度，10min 5. 弃上清，留沉淀，加入1ml的7