实验一 细胞显微结构光镜下细胞器精品.pptVIP

实验一细胞的显微结构——光镜下 的细胞器 College of Life Science and Technology, XINJIANG Univercity  、实验目的 学习并掌握制作植物细胞撕片、石蜡切片 和涂片技术 学会利用光学显微镜观察植物细胞撕片、 石蜡切片和涂片。 认识并能识别光学显微镜下的各种细胞器 的形态、大小、分布特点及数目  实验原理 光学显微镜的种类很多,一般常用的是复式 显微镜。复式显微镜的式样虽有不同,但它们的 基本结构相同,都是由光学部分和机械部分构成。 光学显微镜是利用光学原理,把人眼所不能分辨 的微小物体放大成像,以供人们提取微细结构信 息的光学仪器。表面为曲面的玻璃或其他透明材 料制成的光学透镜可以使物体放大成像,光学显 微镜就是利用这一原理把微小物体放大到人眼足 以观察的尺寸。  实验原理 光学显微镜通常采用两级放大,分别由物镜和目 镜完成。被观察物体位于物镜的前方,被物镜作第 一级放大后成一倒立的实象,然后此实像再被目镜 作第二级放大,成一虚象,人眼看到的就是虚像。 而显微镜的总放大倍率就是物镜放大倍率和目镜放 大倍率的乘积。光学显微镜一般由载物台、聚光照 明系统、物镜,目镜和调焦机构组成。  实验原理 由于光学显微镜的最高分辨力为0.2Jm,而细胞器大部分 在0.1{m和10m之间,所以光学显微镜下可见到一般细胞器 的外部形态。较大的细胞器如细胞核,线粒体,质体等还可 见到其细微结构 细胞器往往由特殊物质组成,因而可通过特殊物质的特 异染色把它们区别开来。每种细胞器都有其特殊形态,大小 分布及数目,这是我们判断,识别细胞器的依据。而每种细 胞器在不同细胞,不同发育时期和不同生理状态下的形态大 小会有所不同。所以细胞器的观察可用来判断细胞的生理状 态和发育情况。  、实验用品和试剂 1.器材:光学显微镜、载玻片、盖玻片、刀片、无菌 注射针头、消毒棉球。 2.试剂:① Ringer溶液 氯化钠 0.85g(变 温动物用0.65g) 氯化钾 0.25g 氯化钙 0.03g 蒸馏水 100m  、实验用品和试剂 ②1%、1/5000詹姆斯绿B溶液 称取50nmg詹姆斯绿B溶于5 mI Ringer溶液 中,稍加微热(30~4000使之溶解,用滤纸过滤后, 即为1%原液。取1%原液1m加入49 mI Ringer溶液,即成 1/5000工作液,装入瓶中备用。最好现用现配,以保持 它的充分氧化能力。 ③ Wri ght染液④70%酒精⑤香柏油 3.材料:洋葱、石蜡切片、涂片  四、实验内容 1.观察细胞核及核仁在不同细胞中的分布情况: ①细胞核及核仁(肝切片,蛙卵巢切片)(伊红-苏 木精染色) ②多核及多核仁现象(横纹肌切片,蛙卵巢切片) (伊红-苏木精染色) ③核形态差异(血细胞涂片)( Wright染色) 2.中心体(马蛔虫受精卵切片)(巴西木素染色) 3.线粒体(兔肝切片,肾切片,植物细胞线粒体撕 片)( Janus green B染色)  五、实验相关技术 1.石蜡切片制作基本技 石蜡切片( paraffin section)组织学 常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切 片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构,也 是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判 断细胞组织的形态变化的主要方法,而且也已 相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。 光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。 活的细胞或组织多为无色透明,各种组织间和 细胞内各种结构之间均缺乏反差,在一般光镜 下不易清楚区别出;  五、实验相关技术 组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败, 失去原有正常结构,因此,组织要经固定、石蜡包 埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡,而能清 晰辨认其形态结构 石蜡切片制作基本步骤:包括取材、固定、洗涤 和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、 染色、脱水、透明、封片等步骤。一般的组织从取 材固定到封片制成玻片标本需要数日,但标本可以 长期保存使用,为永久性显微玻片标本