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实验一 量校关系曲线的测定 一 目的 1 用宼氏法测定LD50和95%可信限。 2 计算LD50。 3 理解其药理学意义。 二 原理 药物给药剂量与动物死亡率间呈正态分布，以对数剂量为横坐标、死亡率为纵坐标作图，可得到一对称S型曲线，其两端较平坦，中间较陡，说明两端处剂量稍有变化时死亡率的改变不易表现出来，在50%死亡率处斜率最大，该处剂量稍有变动时，其死亡率变动最明显，即最灵敏，在技术上也最容易测得准确，所以人们常选用LD50值作为反映药物的指标。若将死亡率换算成机率单位，则对数剂量与机率单位呈直线关系，用数学方法可拟合其回归方程式，可精确地计算LD50及引起任何死亡率的剂量及相关数据。 三 实验材料 1 实验动物 18～22g健康小白鼠50只（正式实验），雌雄各半（雌鼠应无孕），实验前禁食12h，不禁水。 2 器材与药品 注射器（1ml）、电子天平、小鼠笼、苦味酸、品红、甲基紫、戊巴比妥钠。 四 试验方法 1 预备试验 用少量动物9～12只，分3～4组，逐步摸索出是全部动物死亡的最小剂量LD100和一个动物也不死亡的最大剂量LD0，至少应找出引起20%～80%死亡率的剂量范围，以保证量-效曲线跨越足够的范围。一般选组数5~8组，组距i大小主要取决于实验动物对被试因素的敏感性，一般要求i应小于0.155，多在0.08~0.1之间。戊巴比妥钠小鼠腹腔注射（ip）引起0%和100%动物死亡的剂量范围的参考值以测得：最小剂量（Dmin）76.0mg/kg，最大剂量（Dmax） 187.5mg/kg。 2 正式实验 （1）小白鼠的选取与分组 取小白鼠50只，将小鼠雌、雄分开。分别称重，标记小鼠（雌黄，雄红）。雌、雄小鼠分别按重量顺序分层随机分为5组，使不同性别和体重的小鼠能均匀分配于各组，每组10只。 （2）药液配制 按等比稀释法配制药液 最高浓度药液（母液）的配制 小鼠腹腔注射体积为0.2ml/10g= 20ml/kg，每组药液量为4ml左右，为留有余地，各组动物所需药液体积定为6ml。由预备实验可知，最大剂量（Dmax） 187.5mg/kg，换算成质量体积比为9.38 mg/ ml。故得母液所需药量M=V’*9.389.38 mg/ ml=281.25mg。 281.25mg药品加适量生理盐水，定容至30ml，混匀 → 第一组取6ml，剩余24 ml再定容至30 ml，混匀 → 第二组取6ml。以次取至第五组。 （3）给药 各组动物分别腹腔注射相应浓度的药液0.2ml/10g，开始15min内严密观察，以呼吸停止为指标，准确结果为24h内的死亡数。 五 结果 组别 动物数 剂量 对数剂量 死亡数 死亡率 存活率 （只） （ mg/kg ） （只） 1 10 187.5 2.2730 8 80% 20% 2 10 150.0 2.1749 10 100% 0% 3 10 120.0 2.0768 5 50% 50% 4 10 95.0 1.9787 0 0% 100% 5 10 76.0 1.8808 0 0% 100% 确定组距i：把上下限的剂量换算成对数值，设上限剂量的对数值为 Xm ，下限剂量的对数值为 Xn，组数为n，则： i ＝（Xm-Xn） / （n-1）。 得i=0.0981 确定各组剂量：由 Xn 逐次加 i （或由 Xm 逐次减 i），得出各组剂量的对数值，再分别查反对数，即得出各组剂量（呈等比级数排列）。 由最高死亡率100%可确定LD50的计算公式（基本公式）： LD50=lg-1[Xm-i(ΣP-0.5)] ΣP为各组死亡率之和。 得LD50=124.9mg/kg LD50的95%可信限的计算公式=lg-1(lgLD50±1.96×S x50) 其中S x50公式得S x50=0.028。 得LD50的95%可信限为110.2~141.9 mg/kg 。 六 讨论 1 数据处理：由于本实验课实验参与人数较多，存在较大的误差，尤其是1组与2组的实验数据，因此，求LD50中的最大致死量剂量仍为1组的剂量。 2 随机性：实验中能控制的因素尽量使之均衡化，难以控制的因素也应