粪大肠杆菌群测定方法.pdfVIP

水质 粪大肠菌群的测定 粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分， 主要来自粪便。 在 44.5℃温度下能生长并发酵乳 糖产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。 用提高培养温度的方法， 造成不利于来自自然环境 的大肠菌群生长的条件， 使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群， 从而更准确地反映 出水质受粪便污染的情况。粪大肠菌群的测定可以用多管发酵法和滤膜法。 第一篇 多管发酵法 1. 适用范围 本标准适用于地表水、地下水及废水中粪大肠菌群的测定。 2. 原理 多管发酵法是以最可能数（ most probable number ）简称 MPN 来表示试验结果的。实 际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。如果从理 论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。不过只 要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取 决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度。因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数 目，要根据所要求数据的准确度而定。 3. 培养基和试剂 本标准所用试剂除另有注明外，均为符合国家标准的分析纯化学试剂；实验用水为新 制备的去离子水。 3.1 单倍乳糖蛋白胨培养液： 成分： 蛋白胨 10g 牛肉浸膏 3g 乳糖 5g 氯化钠 5g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL 蒸馏水 1000mL 制法：将蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠加热溶解于 1000mL 蒸馏水中，调节 pH 为 7.2 ～7.4，再加入 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL ，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管 的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在 115℃灭菌 20min ，贮存于暗处备用。 3.2 三倍乳糖蛋白胨培养液：按上述配方比例三倍（除蒸馏水外） ，配成三倍浓缩的乳 糖蛋白胨培养液，制法同上。 3.3 EC 培养液： 成分： 胰胨 20g 乳糖 5g 胆盐三号 1.5g 磷酸氢二钾（ K2HPO4 ） 4g 磷酸二氢钾（ KH2PO4 ） 1.5g 氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL 制法：将上述成分加热溶解，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。置高压蒸汽灭菌器 中， 115℃灭菌 20min 。灭菌后 pH 应为 6.9 。 3.4 培养基的存放 在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于 30℃的暗处，存放时应 避免阳光直接照射， 并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。 当培养液颜色变化， 或体积变化明显 时废弃不用。 4. 步骤 4.1 水样接种量 将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品 至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管。 相对未受污染的水样接种量为 10mL 、 1mL 、0.1mL 。受污染水样接种量根据污染程度 接种 1mL 、0.1mL 、0.0