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葡萄糖测定方法
原理
3,5-二硝基水杨酸（ DNS ）与还原性糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，该物质在
520 nm 处有最大吸收峰， 且在一定范围内吸收峰的强度 （OD 值）与还原糖浓度成线性关系，
利用比色法可测得样品的含糖量。该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰少。
试剂
1）3, 5-二硝基水杨酸试剂（ DNS 试剂）
甲液 ：溶解 6.9 g 苯酚于 15.2 mL 10% NaOH 中，并稀释至 69 mL ，在此溶液中加入 6.9
g NaHSO 3；
乙液 ：称取 255 g 酒石酸钾钠，加到 300 mL 10% NaOH 中，再加入 880 mL 1% 的 3,5-
二硝基水杨酸。
甲、乙液混合得黄色试剂，贮存于棕色瓶中，室温放置 7-10 天后备用。
2 ）0.1% 葡萄糖标准液（ 1 g/L ）
准确称取 100 mg 分析纯的葡萄糖 （预先在 105℃干燥至恒重） ，加少量的蒸馏水溶解后
定容至 100 ml ，冰箱中保存备用。
操作步骤
2 mL 样品（稀释） + 1.5 mL DNS → 沸水浴 5 min → 流水立即冷却至室温 → 定容至
25 mL → 520 nm 处检测 OD 值
浓度范围
0 ~ 0.5 g/L
标准曲线
葡萄糖母液 1 g/L ：称取 1.1 g 葡萄糖，溶于 1000 mL 去离子水。
反应体系：
试管号 0 1 2 3 4 5
项目 (0.1 g/L) (0.2 g/L) (0.3 g/L) (0.4 g/L) (0.5 g/L)
DNS （mL ） 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
葡萄糖母液（ mL ） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
水（ mL ） 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1
注意事项
1）考虑葡萄糖的结晶水；
2 ）可以根据稀释倍数计算加入反应体系的样品量，不足的补水。
3）OD 520 在 0.1~1.0 之间时，葡萄糖的浓度基本上与吸光值呈线性关系，超过该范围，则应
当适当稀释。
参考文献
[1] Miller G L. Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugars [J]. Anal.
Chem., 1959, 31: 426-428
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